【摘 要】
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南非2型口蹄疫(Foot-and-mouth disease serotypes Southern African territories 2,SAT2-FMD)是由南非2型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus serotypes Southern Afr
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/世界动物卫生组织(OIE)/国家口蹄疫参考实验室,兰州730046甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家
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南非2型口蹄疫(Foot-and-mouth disease serotypes Southern African territories 2,SAT2-FMD)是由南非2型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus serotypes Southern African territories 2,SAT2-FMDV)引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病.当前全球贸易和人员往来频繁,SAT2-FMD传入中国的风险极高,这将严重威胁我国养殖业持续健康发展.为原核可溶性表达SAT2-FMDV(GenBank No.JX014256)VP1基因,探索VP1融合蛋白的免疫原性,本研究以序列优化的pUC57-His-SUMO-SAT2-VP1重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得993 bp目的 序列,扩增产物克隆入pET32a(+)原核表达载体,构建pET32a-HisSUMO-VP1重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),诱导表达,亲和层析纯化.将纯化后HisSUMO-VP1融合蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫Balb/C小鼠(Mus musculus),并对免疫小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖和细胞因子水平进行测定.研究结果表明,HisSUMO-VP1融合蛋白实现原核可溶性表达,大小约为63 kD,且具有较好的反应原性;免疫小鼠实验结果发现,HisSUMO-VP1融合蛋白组的小鼠免疫血清抗体水平极显著高于HisSUMO蛋白组和PBS组(P<0.001),且抗体水平呈上升趋势;HisSUMO-VP1融合蛋白组小鼠脾脏淋巴细胞发生显著地增殖反应(P<0.001),细胞因子IFN-γ和IL-2水平显著高于PBS组(P<0.05).本研究成功实现SAT2-FMDV-VP1基因的原核可溶性表达,表达的HisSUMO-VP1融合蛋白具有良好的免疫原性,为SAT2-FMDV疫苗及检测方法的研发提供数据支持.
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