【摘 要】
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目的:制备特异性结合人紧密连接蛋白18.2（Claudins18.2,CLDN18.2）单克隆抗体。方法:采用编码人CLDN18.2的质粒DNA和高表达人CLDN18.2重组细胞系免疫小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体，并对其进行活性鉴定。通过Cell-based ELISA方法进行杂交瘤筛选获得特异性抗体，并构建嵌合抗体对其与高表达重组细胞系和低表达CLDN18.2的NUGC4细胞结合活
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目的:制备特异性结合人紧密连接蛋白18.2（Claudins18.2,CLDN18.2）单克隆抗体。方法:采用编码人CLDN18.2的质粒DNA和高表达人CLDN18.2重组细胞系免疫小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体，并对其进行活性鉴定。通过Cell-based ELISA方法进行杂交瘤筛选获得特异性抗体，并构建嵌合抗体对其与高表达重组细胞系和低表达CLDN18.2的NUGC4细胞结合活性进行评价；采用报告基因法对嵌合抗体的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）活性进行检测；采用CCK8法对嵌合抗体的补体依赖的细胞毒性作用（complement dependent cytotoxicity, CDC）活性和增殖抑制活性进行检测。结果:共筛选出4株特异性结合人CLDN18.2的杂交瘤细胞株，分别命名为mab429,mab623,mab624,mab782,并对其进行亚型测定；成功获得4株抗体可变区序列，并构建嵌合抗体；嵌合抗体均与人CLDN18.2特异性结合，其中嵌合抗体ch782与NUGC4细胞结合活性优于参照抗体。ch782能诱导对靶细胞的ADCC活性和CDC活性，且ch782对NUGC4细胞的ADCC活性强于参照抗体；ch782对靶细胞的增殖抑制效果优于参照抗体，并且具有一定的剂量依赖效应。结论:制备了高亲和力特异性结合CLDN18.2的单克隆抗体，并对其结合活性、ADCC活性、CDC活性、增殖抑制活性进行了评估。
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