【摘 要】
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聚乙烯醇脱氢酶(PVADH)是降解聚乙烯醇(PVA)的关键酶,大肠杆菌或毕赤酵母生产PVADH需额外添加辅酶吡咯喹啉醌(PQQ)才具活性。为了降低添加PQQ的成本,在PQQ天然生产菌肺炎克雷
【基金项目】
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国家自然科学基金(21476011);国家高新技术研究开发计划(“863”计划)(2015AA021003);国家基础研究计划(“973”计划)(2012CB725200)
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聚乙烯醇脱氢酶(PVADH)是降解聚乙烯醇(PVA)的关键酶,大肠杆菌或毕赤酵母生产PVADH需额外添加辅酶吡咯喹啉醌(PQQ)才具活性。为了降低添加PQQ的成本,在PQQ天然生产菌肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)中表达全酶PQQ-PVADH。首先通过外源基因密码子优化实现PVADH的高效表达,PVADH酶活达到45U/mL;进而通过辅酶再生提高PQQ产量,双质粒重组菌Kp(pvadh+pqq)的PVADH酶活达到68U/mL;最后经发酵优化,PVADH酶活达到81U/mL,为
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