【摘 要】
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为了建立牛轭湖病毒（Bayou virus,BAYV）、纽约病毒（New York virus,NYV）、厄尼诺洛峡谷病毒（El Moro Canyon virus,ELMCV）以及岛景病毒（Isla Vista virus,ISLAV）四种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术,本研究选用上述四种病毒的N蛋白基因作为靶标区域设计四组特异性引物探针,建立四重实时荧光定量RT-PCR检测方法。用四种病毒体
【基金项目】
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国家科技重大专项（项目号:2018ZX10711-001）,题目:病毒感染高通量快速检测与应急筛查技术研究～～；
论文部分内容阅读
为了建立牛轭湖病毒（Bayou virus,BAYV）、纽约病毒（New York virus,NYV）、厄尼诺洛峡谷病毒（El Moro Canyon virus,ELMCV）以及岛景病毒（Isla Vista virus,ISLAV）四种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术,本研究选用上述四种病毒的N蛋白基因作为靶标区域设计四组特异性引物探针,建立四重实时荧光定量RT-PCR检测方法。用四种病毒体外转录RNA进行灵敏度和重复性验证,并使用其他病毒细胞培养物及体外转录RNA进行特异性验证。结果显示,四重实时荧光定量PCR扩增效率均可达到95%以上,四种病毒体外转录RNA灵敏度介于1～10拷贝/μL,与单重检测方法无明显差异,且与其他病毒无交叉反应。稳定性评价结果显示,批内、批间变异系数均在3%以内。本研究所建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于相关样本的诊断与筛查。
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