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摘 要：目的：分析在胰腺癌肿瘤浸润的淋巴细胞预后方面CEACAM6和FOXP3产生的影响。方法：搜集2015年12月至2016年12月在中南大学湘雅医院治疗的胰腺癌患者45例，通过免疫组织的化学法对患者胰腺癌组织之中RO、CEACAM6、CD45、FOXP3、CD8与CD3表达进行检测，同时探讨各种指标和病理特征、预后之间的相关性。结果：FOXP3的表达和CD45RO、CD3以及CD8阳性T细胞低浸相关，但是和CD4+T的细胞浸润没有显著相关性；CEACAM6高表达和CD45RO+T细胞、CD8+T细胞低浸润相关，和CD4+T细胞、CD3+T细胞浸润没有明显的关系。结论：肿瘤浸润的淋巴细胞浸润密度和胰腺癌预后、临床分期以及组织分化息息相关，CEACAM6与FOXP3和胰腺癌的恶性程度有着相关性，且都可以对肿瘤浸润的淋巴细胞进行抑制。
中图分类号：R735.9文献标识码：A
一、引言
胰腺癌消化系统的恶性肿瘤，主要特点是生存期比较短、早期诊断难度大、手术切除率比较低等。即便近几年在胰腺癌病理生理研究方面取得一定成果，但死亡率与发病率没有变化。胰腺癌免疫功能研究始终是一个热点，通常肿瘤浸润的淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes，TIL）主要是由肿瘤组织分离而来，含有肿瘤特异性的细胞毒性T 淋巴细胞与自然杀伤（natural killer，NK）的细胞，有抗肿瘤的反应。研究中指出，肿瘤中浸润CD45RO+T 细胞、CD3+T 细胞以及CD8+T细胞和预后有一定关系，调节性的T细胞（regulatory T cells，T reg）有免疫抑制的效果，特异性的标志属于核转录因子的叉头盒P3（（forkhead box P3，FOXP3），Treg高表达和胰腺癌、卵巢癌以及结直肠癌恶性程度有正相关关系。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）属于蛋白家族，和细胞黏附有关，因此，也叫做癌胚抗原相关的黏附分子（CEA-related cell adhesion molecule，CEACAM）。本文将2015年12月至2016年12月在中南大学湘雅医院治疗的胰腺癌患者45例作为此次的探究对象，简析了在胰腺癌肿瘤浸润的淋巴细胞预后方面CEACAM6和FOXP3产生的影响。
二、研究资料和方法
1.研究的资料
搜集2015年12月至2016年12月在中南大学湘雅医院治疗的胰腺癌患者45例，所有患者术前均未接受放化疗或免疫治疗。有25例患者是男性，有20例患者是女性；患者的年龄跨度在44～78歲之间，年龄均值是（69±2.91）岁。根据国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC） 的分期实施TNM 分期，25例患者是Ⅰ期与Ⅱ期，20例患者是Ⅲ期与Ⅳ期。按照组织病理的分级，有17例是高分化，有28例是中低分化。
试剂：兔抗人CD8 mAb、小鼠抗人CD3的单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）以及兔抗人CD4的多克隆抗体，都选自Santa Cruz公司，小鼠抗人的FOXP3mAb、小鼠抗人的CD45ROmAb以及兔抗人CEACAM6mAb都来自Abcam公司，而Chem Mate EnvisionTM兔/小鼠标所用免疫组织的化学试剂盒采购于Dako公司。
2.方法
将胰腺癌的石蜡包埋组织切片，大小为4微米，经脱蜡与水化，然后用高压锅加热，修复抗原。通过30mL/L的双氧水对内源性的过氧化物酶进行灭活，添加50升兔抗人CD8mAb（1∶100）、灭小鼠抗人CD3 mAb（1∶100）以及兔抗人CD4多克隆抗体（1∶100），同时加入小鼠抗人FOXP3 mAb （1∶50）、CD45RO mAb（1∶10）与兔抗人CEACAM6mAb（1∶400），在37摄氏度条件下孵育1个小时，在室温条件下孵育30分钟。应用DAB来显色，用苏木精衬染，将人扁桃体的组织作为阳性对照，而省略一抗当做空白的对照。
3.观察的指标
应用半定量的方法对FOXP3、CD3、CEACAM6、CD4、CD45RO与CD8浸润、表达进行判断，按照染色的强度分成3（棕色）、2（棕黄色）、1（浅黄色）与0（无色）。按照阳性细胞百分比分成：4（≥75%）、3（50%～74%）、2（25%～49%）、1（5%～24%）与0（0%～5%）。分数相加总分划分为：（+++）为5～7分、（++）为3～4分、（+）为2分、0～1分为（-），（-）与（+）代表阴性的表达，（++）代表弱阳性的表达，（+++）代表强阳性的表达。
4.应用统计软件统计所得数据
本次实验得出数据都需要实施分析与整理，然后使用统计软件SPSS19.0进行统计学分析，对实验研究中出现的所有相关数据均进行整理和分析，通过标准差（x±s）来表示计量资料，通过卡方（x2）表示计数资料，应用独立的样本t对组间的构成比进行检验，如果实验所得数据经对比以后存在统计意义，用P<0.05表示。
三、结果
1.免疫组织的化学染色结果和临床病理相关性
在Ⅲ期与Ⅳ期胰腺癌之中，FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与Ⅰ、Ⅱ期相比差异比较显著，P<0.05；在中低分化中胰腺癌之中，FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与高分化中FOXP3与CEACAM6的高表达相比，有显著差异，P<0.05（见表1）。
2.FOXP、CEACAM6和T細胞相关性
FOXP3的表达和CD45RO、CD3以及CD8阳性T细胞低浸相关，但是和CD4+T的细胞浸润没有显著相关性；CEACAM6高表达和CD45RO+T细胞、CD8+T细胞低浸润相关，和CD4+T细胞、CD3+T细胞浸润没有明显的关系（见表2）。 四、讨论
肿瘤浸润的淋巴细胞浸润目的可以反映宿主对癌细胞免疫应答的强弱，CD45RO、CD3以及CD8与阳性T细胞浸润、胰腺癌发展、总体预后有着密切相关性。本次研究显示，FOXP3的表达和CD45RO、CD3以及CD8阳性T 细胞低浸相关，但是和CD4+T的细胞浸润没有显著相关性；CEACAM6高表达和CD45RO+T细胞、CD8+T细胞低浸润相关，和CD4+T细胞、CD3+T细胞浸润没有明显的关系。转录因子的FOXP3 基因与编码产物Scurfin 会参与到Treg中枢性生成过程中，同时会对Treg免疫调节的功能发挥产生影响。通常FOXP3表达和恶性肿瘤不良预后相关，FOXP3一般是在抑制白细胞介素基础上，对T细胞活化增殖进行抑制。本次研究还显示，在Ⅲ期与Ⅳ期胰腺癌之中FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与Ⅰ、Ⅱ期相比差异比较显著，P<0.05。研究结果显示，在Ⅲ期与Ⅳ期FOXP3表达相对较高。
五、结语
综上所述，肿瘤浸润的淋巴细胞浸润密度和胰腺癌预后、临床分期以及组织分化息息相关，CEACAM6与FOXP3和胰腺癌恶性程度有着相关性，两者都可以对肿瘤浸润的淋巴细胞进行抑制。
參考文献：
[1]彭 杰，蒋重骅，龙泓羽，等.癌胚抗原相关细胞黏附分子6在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[J].中国现代医学杂志，2013（2）：57-60.
[2]陈琳琳，谷 欢，彭 杰，等.非编码RNA与胰腺癌[J].中南大学学报（医学版），2014（5）：532-540.
[3]郑益红，温美福，叶新桥，等.肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系[J].当代医学，2016（32）：19-20.
[4]申苗苗，黄韵红，胡云飞，等.骨髓涂片免疫组织化学与骨髓活组织检查诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润的比较[J].白血病·淋巴瘤，2016（12）：728-732.
[5]崔莹珊，陈小林，周航亮.术前外周血小板与淋巴细胞比值与结直肠癌术后患者临床预后研究[J].新医学，2015（10）：685-689.
[6]Zhang S，Defrias DV，Alasadi R，et a1.Endoscopic ultrasound—guided fineneedle aspiration（EUS—FNA）：experience of an academic centre in the USA [J].Cytopathology，2010，21（1）：35-43.
[7]唐藝宸.肿瘤浸润调节性T淋巴细胞与胰岛癌进展及预后的相关性研究[D].重庆：第三军医大学，2014.
中图分类号：R735.9文献标识码：A
一、引言
胰腺癌消化系统的恶性肿瘤，主要特点是生存期比较短、早期诊断难度大、手术切除率比较低等。即便近几年在胰腺癌病理生理研究方面取得一定成果，但死亡率与发病率没有变化。胰腺癌免疫功能研究始终是一个热点，通常肿瘤浸润的淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes，TIL）主要是由肿瘤组织分离而来，含有肿瘤特异性的细胞毒性T 淋巴细胞与自然杀伤（natural killer，NK）的细胞，有抗肿瘤的反应。研究中指出，肿瘤中浸润CD45RO+T 细胞、CD3+T 细胞以及CD8+T细胞和预后有一定关系，调节性的T细胞（regulatory T cells，T reg）有免疫抑制的效果，特异性的标志属于核转录因子的叉头盒P3（（forkhead box P3，FOXP3），Treg高表达和胰腺癌、卵巢癌以及结直肠癌恶性程度有正相关关系。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）属于蛋白家族，和细胞黏附有关，因此，也叫做癌胚抗原相关的黏附分子（CEA-related cell adhesion molecule，CEACAM）。本文将2015年12月至2016年12月在中南大学湘雅医院治疗的胰腺癌患者45例作为此次的探究对象，简析了在胰腺癌肿瘤浸润的淋巴细胞预后方面CEACAM6和FOXP3产生的影响。
二、研究资料和方法
1.研究的资料
搜集2015年12月至2016年12月在中南大学湘雅医院治疗的胰腺癌患者45例，所有患者术前均未接受放化疗或免疫治疗。有25例患者是男性，有20例患者是女性；患者的年龄跨度在44～78歲之间，年龄均值是（69±2.91）岁。根据国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC） 的分期实施TNM 分期，25例患者是Ⅰ期与Ⅱ期，20例患者是Ⅲ期与Ⅳ期。按照组织病理的分级，有17例是高分化，有28例是中低分化。
试剂：兔抗人CD8 mAb、小鼠抗人CD3的单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb）以及兔抗人CD4的多克隆抗体，都选自Santa Cruz公司，小鼠抗人的FOXP3mAb、小鼠抗人的CD45ROmAb以及兔抗人CEACAM6mAb都来自Abcam公司，而Chem Mate EnvisionTM兔/小鼠标所用免疫组织的化学试剂盒采购于Dako公司。
2.方法
将胰腺癌的石蜡包埋组织切片，大小为4微米，经脱蜡与水化，然后用高压锅加热，修复抗原。通过30mL/L的双氧水对内源性的过氧化物酶进行灭活，添加50升兔抗人CD8mAb（1∶100）、灭小鼠抗人CD3 mAb（1∶100）以及兔抗人CD4多克隆抗体（1∶100），同时加入小鼠抗人FOXP3 mAb （1∶50）、CD45RO mAb（1∶10）与兔抗人CEACAM6mAb（1∶400），在37摄氏度条件下孵育1个小时，在室温条件下孵育30分钟。应用DAB来显色，用苏木精衬染，将人扁桃体的组织作为阳性对照，而省略一抗当做空白的对照。
3.观察的指标
应用半定量的方法对FOXP3、CD3、CEACAM6、CD4、CD45RO与CD8浸润、表达进行判断，按照染色的强度分成3（棕色）、2（棕黄色）、1（浅黄色）与0（无色）。按照阳性细胞百分比分成：4（≥75%）、3（50%～74%）、2（25%～49%）、1（5%～24%）与0（0%～5%）。分数相加总分划分为：（+++）为5～7分、（++）为3～4分、（+）为2分、0～1分为（-），（-）与（+）代表阴性的表达，（++）代表弱阳性的表达，（+++）代表强阳性的表达。
4.应用统计软件统计所得数据
本次实验得出数据都需要实施分析与整理，然后使用统计软件SPSS19.0进行统计学分析，对实验研究中出现的所有相关数据均进行整理和分析，通过标准差（x±s）来表示计量资料，通过卡方（x2）表示计数资料，应用独立的样本t对组间的构成比进行检验，如果实验所得数据经对比以后存在统计意义，用P<0.05表示。
三、结果
1.免疫组织的化学染色结果和临床病理相关性
在Ⅲ期与Ⅳ期胰腺癌之中，FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与Ⅰ、Ⅱ期相比差异比较显著，P<0.05；在中低分化中胰腺癌之中，FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与高分化中FOXP3与CEACAM6的高表达相比，有显著差异，P<0.05（见表1）。
2.FOXP、CEACAM6和T細胞相关性
FOXP3的表达和CD45RO、CD3以及CD8阳性T细胞低浸相关，但是和CD4+T的细胞浸润没有显著相关性；CEACAM6高表达和CD45RO+T细胞、CD8+T细胞低浸润相关，和CD4+T细胞、CD3+T细胞浸润没有明显的关系（见表2）。 四、讨论
肿瘤浸润的淋巴细胞浸润目的可以反映宿主对癌细胞免疫应答的强弱，CD45RO、CD3以及CD8与阳性T细胞浸润、胰腺癌发展、总体预后有着密切相关性。本次研究显示，FOXP3的表达和CD45RO、CD3以及CD8阳性T 细胞低浸相关，但是和CD4+T的细胞浸润没有显著相关性；CEACAM6高表达和CD45RO+T细胞、CD8+T细胞低浸润相关，和CD4+T细胞、CD3+T细胞浸润没有明显的关系。转录因子的FOXP3 基因与编码产物Scurfin 会参与到Treg中枢性生成过程中，同时会对Treg免疫调节的功能发挥产生影响。通常FOXP3表达和恶性肿瘤不良预后相关，FOXP3一般是在抑制白细胞介素基础上，对T细胞活化增殖进行抑制。本次研究还显示，在Ⅲ期与Ⅳ期胰腺癌之中FOXP3与CEACAM6的高表达比较高，与Ⅰ、Ⅱ期相比差异比较显著，P<0.05。研究结果显示，在Ⅲ期与Ⅳ期FOXP3表达相对较高。
五、结语
综上所述，肿瘤浸润的淋巴细胞浸润密度和胰腺癌预后、临床分期以及组织分化息息相关，CEACAM6与FOXP3和胰腺癌恶性程度有着相关性，两者都可以对肿瘤浸润的淋巴细胞进行抑制。
參考文献：
[1]彭 杰，蒋重骅，龙泓羽，等.癌胚抗原相关细胞黏附分子6在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[J].中国现代医学杂志，2013（2）：57-60.
[2]陈琳琳，谷 欢，彭 杰，等.非编码RNA与胰腺癌[J].中南大学学报（医学版），2014（5）：532-540.
[3]郑益红，温美福，叶新桥，等.肿瘤浸润T淋巴细胞在乳腺癌原发灶中的表达与预后的关系[J].当代医学，2016（32）：19-20.
[4]申苗苗，黄韵红，胡云飞，等.骨髓涂片免疫组织化学与骨髓活组织检查诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润的比较[J].白血病·淋巴瘤，2016（12）：728-732.
[5]崔莹珊，陈小林，周航亮.术前外周血小板与淋巴细胞比值与结直肠癌术后患者临床预后研究[J].新医学，2015（10）：685-689.
[6]Zhang S，Defrias DV，Alasadi R，et a1.Endoscopic ultrasound—guided fineneedle aspiration（EUS—FNA）：experience of an academic centre in the USA [J].Cytopathology，2010，21（1）：35-43.
[7]唐藝宸.肿瘤浸润调节性T淋巴细胞与胰岛癌进展及预后的相关性研究[D].重庆：第三军医大学，2014.