【摘 要】
：
目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能.方法 将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因
【机 构】
：
华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科,武汉 430030
论文部分内容阅读
目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系RKO中稳定敲除MCT1基因,并检测其生物学功能.方法 将CRISPRv2-MCT1-KO#1、CRISPRv2-MCT1-KO#2质粒转染至RKO细胞中,48 h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用Western blot和DNA测序技术检测MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过GSEA软件分析MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路.结果 CRISPRv2-MCT1-KO质粒成功构建;Western blot和DNA测序结果显示稳定敲除MCT1基因的人结肠癌RKO细胞构建成功;与对照组相比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低(P<0.01);MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);GSEA分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展.结论 通过CRISPR/Cas9技术成功构建MCT1基因稳定敲除的结肠癌RKO细胞系,可能成为研究MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具.
其他文献
目的:研究开放式鼓室形成术在胆脂瘤型中耳炎治疗中的应用效果.方法:本研究共纳入胆脂瘤型中耳炎患者100例,均为祁阳县人民医院2020年4月至2021年4月所收治,将其随机分为观察组及对照组,各50例.对照组接受乳突根治术治疗,观察组接受开放式鼓室形成术治疗,针对两组患者的临床疗效、鼓膜愈合情况及干耳情况进行观察比较.结果:观察组患者的临床总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜ 0.05);观察组患者的鼓膜愈合情况及干耳情况优于对照组,差异具有统计学意义(P＜ 0.05).结论:开放式鼓室形成术对
目的:探讨肋骨接骨板对骨折内固定术后并发症的影响.方法:选取2018年2月至2020年2月于英德市中医院就诊的165例多发肋骨骨折患者,根据治疗方法不同分为两组,对照组80例采用传统局部加压包扎疗法,观察组85例采用纯钛爪型肋骨接骨板内固定术治疗.比较两组住院时间、止痛药物使用剂量、引流管放置时间、疼痛评分、术后并发症等情况.结果:观察组患者住院时间、引流管放置时间短于对照组,止痛药物使用剂量少于对照组,视觉模拟评分法(VAS)评分低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);观察组患者骨折移位、胸廓
目的:探讨腹腔镜下胆囊切除术对小儿胆囊结石的治疗效果并总结经验.方法:选取2009年12月至2020年10月武警新疆总队医院肝胆外科收治的胆囊结石患儿30例,均行腹腔镜下胆囊切除术治疗,观察患儿的治疗效果.结果:患儿的手术时间为50.5 ～ 75.8 min,平均(63.5±10.1)min,术中出血量为20.2～41.3 mL,平均(34.5±6.8)mL,切口长度为4～6cm,平均(4.8±0.6)cm.所有患儿于术后23～25 h通气,胃肠道功能恢复,平均(23.9±3.8)h,住院时间11～26
目的:探讨锌剂联合叶酸治疗小儿腹泻的临床价值.方法:选取2019年1月至2020年9月河源市妇幼保健院收治的100例腹泻患儿为研究对象,根据其治疗方案分为观察组和对照组,各50例.对照组采取纠正水电解质失衡、抗感染等常规治疗,观察组在对照组治疗的基础上,采用锌剂联合叶酸治疗,两组患儿均治疗10d后进行疗效评价.比较两组患儿腹泻停止时间、大便恢复正常时间、体温恢复正常时间、住院时间和不良反应发生率.结果:观察组患儿的治疗总有效率为94.00％,高于对照组的80.00％,差异具有统计学意义(P＜0.05);观
目的:观察高通量血液透析联合血液灌流治疗终末期糖尿病肾病的临床疗效.方法:选取2018年3月至2019年3月在广州市番禺区何贤纪念医院治疗的终末期糖尿病肾病患者100例为研究对象,根据透析治疗方案不同分为对照组和观察组,各50例.对照组患者给予低通量血液透析联合血液灌流治疗,观察组患者给予高通量血液透析联合血液灌流治疗,比较两组患者炎症状态指标[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)],β2微球蛋白、尿素下降率(URR)、尿素清除指数(KT/V)及透析相
带状疱疹中医称之为“蛇串疮”“腰缠火丹”“蜘蛛疮”等,是由水痘-带状疱疹病毒感染所致,该病毒在初次感染人体后往往潜伏在脊髓后根神经节内,在人体免疫力功能相对低下时再次活化而发病[1].一般来讲患过带状疱疹的患者体内可产生免疫球蛋白G (immunoglobulin G,IgG)保护型抗体,愈后能够获得终身的免疫力,不会再次发作[2].
目的:研究胎儿未足月产妇胎膜早破应用抗菌药物时间对妊娠结局的影响.方法:选取2018年10月至2019年10月期间洛阳东方医院收治的72例胎儿未足月胎膜早破产妇,根据抗菌药物应用时间分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,三组均为24例.Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组分别于胎膜破裂后12h内、12～24 h、超过24 h应用抗菌药物头孢唑林钠,均持续用药3d.比较三组的临床疗效.结果:Ⅰ组产妇自入院至分娩时间为(62.76±4.97)h,Ⅱ组为(58.04±4.53)h,Ⅲ组为(53.41±4.74)h,Ⅰ组时间均显著长于Ⅱ组和Ⅲ组,差
目的 研究心肌素(myocardin,MYOCD)基因对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移侵袭能力的影响及机制.方法 TCGA数据库、荧光实时定量PCR与Western blot检测结直肠癌组织与正常组织中的MYOCD基因表达差异;构建高表达MYOCD结直肠癌细胞系,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、划痕实验检测CRC细胞迁移、侵袭能力,运用生物信息学方法研究M YOCD对CRC组织干细胞特性的影响,并用克隆形成实验进
目的:研究联合曲美他嗪、阿托伐他汀在冠心病心绞痛伴血脂异常患者中的疗效.方法:选取2019年6月至2020年6月在瑞金市人民医院就诊的156例冠心病心绞痛患者,随机分为两组,每组78例.对照组选择曲美他嗪治疗,观察组在对照组基础上联合阿托伐他汀钙治疗,比较两组患者治疗的效果.结果:观察组患者治疗总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗后观察组患者甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均低于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)高于对照组,差异
目的:评定支原体肺炎患儿采取阿奇霉素给药治疗方法的有效性.方法:选取汉寿县人民医院2018年2月至2020年4月期间收治的72例支原体肺炎患儿,采用抽签方式分为对照组与观察组,各36例.观察组选择常规给药治疗加阿奇霉素给药治疗方法,对照组选择常规给药治疗加红霉素给药治疗方法,分析给药治疗干预有效共同占比数、胸片检验结果恢复正常时间、肺部啰音消失时间、发烧症状及咳嗽消退时间,观察治疗前后用力肺活量(FVC)测定结果.结果:观察组患儿治疗总有效率为94.44％,高于对照组的77.78％,差异具有统计学意义(P