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目的
原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段(Gn、Gc1和Gc2)并分别制备其多克隆抗体。
方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段,并将其构建到原核表达载体pET-28a(+)中,转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白,SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量(Mr)。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。
结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确,表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr分别约为25×103、33×103和34×103。ELISA法检测抗体效价分别为1∶25 600、1∶6400及1∶25 600。Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。
结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备,为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。