【摘 要】
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以茄子基因组 DNA 为模板,利用正交设计方法对茄子 SSR 反应体系中的 Mg2+、模板 DNA、Taq 聚合酶、dNTP、引物5个因素进行了优化,同时对反应程序中的退火温度及循环次数进行
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以茄子基因组 DNA 为模板,利用正交设计方法对茄子 SSR 反应体系中的 Mg2+、模板 DNA、Taq 聚合酶、dNTP、引物5个因素进行了优化,同时对反应程序中的退火温度及循环次数进行筛选。结果确定了茄子10 μL体积 SSR 反应体系的最优条件为:Buffer 为1 μL,Mg2+为2.25 mmol·L-1,dNTP 为400 μmol·L-1,上下游引物各为39.60 ng,Taq 聚合酶为0.75 U,DNA 约为100ng。PCR 程序为94 ℃预变性2 min;然后进行35个循环的94℃变性30 s,52℃复性30 s,72℃延伸45 s;72℃延伸8 min 后4℃保存。
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