【摘 要】
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目的 建立石英微孔板法酶底物检测尿酸酶活性的方法,并对方法进行验证.方法 摸索尿酸浓度与吸光度之间的线性关系,找到合适的范围,并验证方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性.尿酸酶加入固定浓度尿酸溶液,酶促反应5 min后,通过酶标仪检测A292nm值变化计算尿酸的含量,根据单位时间内尿酸减少量计算出尿酸酶的活性.结果 专属性验证结果显示,空白对照尿酸浓度未检出,25 μg/maL尿酸样品的回收率为102.0％,50 μg/mL尿酸用等体积的硼酸缓冲液稀释后的样品回收率为103.2％,表明专
【机 构】
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上海生物制品研究所有限责任公司研发部第二研究室,上海200051
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目的 建立石英微孔板法酶底物检测尿酸酶活性的方法,并对方法进行验证.方法 摸索尿酸浓度与吸光度之间的线性关系,找到合适的范围,并验证方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性.尿酸酶加入固定浓度尿酸溶液,酶促反应5 min后,通过酶标仪检测A292nm值变化计算尿酸的含量,根据单位时间内尿酸减少量计算出尿酸酶的活性.结果 专属性验证结果显示,空白对照尿酸浓度未检出,25 μg/maL尿酸样品的回收率为102.0％,50 μg/mL尿酸用等体积的硼酸缓冲液稀释后的样品回收率为103.2％,表明专属性较好.尿酸质量浓度在0-50 μg/mL范围内线性关系良好,R2＞0.99.该方法重复性验证的RSD为0.6％;中间精密度验证的RSD为1.4％;准确性验证的3个样品回收率分别为101.3％、101.3％、101％,RSD分别为1.1％、1.2％、0.7％;不同温度条件下,耐用性验证的RSD为4.8％.结论 本实验建立了微孔板酶底物检测尿酸酶活性的方法,该方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性良好,可用于尿酸酶活性的定量检测.
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