【摘 要】
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目的 评价磷酸二酯酶4B(PDE4B)在脂多糖诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放中的作用.方法 采用随机数字表法,将原代大鼠小胶质细胞分为5组(n=24):对照组、脂多糖组、单纯载体组、错配小干扰RNA组(siRNA)组和PDE4B-siRNA组.对照组和脂多糖组不转染;单纯载体组给予脂质载体1 μl;错配siRNA组和PDE4B-siRNA组分别加入错配siRNA 2μl、PDE4B-siRNA 2
【机 构】
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目的 评价磷酸二酯酶4B(PDE4B)在脂多糖诱导大鼠小胶质细胞炎性因子释放中的作用.方法 采用随机数字表法,将原代大鼠小胶质细胞分为5组(n=24):对照组、脂多糖组、单纯载体组、错配小干扰RNA组(siRNA)组和PDE4B-siRNA组.对照组和脂多糖组不转染;单纯载体组给予脂质载体1 μl;错配siRNA组和PDE4B-siRNA组分别加入错配siRNA 2μl、PDE4B-siRNA 2 μl与脂质载体1μl(加入100μl无血清培养基中,siRNA终浓度为20 nmol/L),各组转染或培养48 h后,采用Western blot法和RT-PCR法分别测定PDE4B蛋白与mRNA的表达,除对照组外其余各组加入含有脂多糖100 ng/ml的无血清培养基,培养24 h后采用ELISA法测定TNF-α及IL-1β释放水平,采用Western blot 法检测小胶质细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达.结果 与对照组相比,其余4组TNF-α和IL-1β释放水平升高,小胶质细胞p-ERK表达上调,PDFB-siRNA组小胶质细胞PDE4B蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05),脂多糖组、单纯载体组和错配siRNA组差异无统计学意义(P＞0.05);与脂多糖组相比,PDE4B-siRNA组TNF-α和IL-1β释放水平降低,p-ERK表达下调(P＜0.05),单纯载体组和错配siRNA组差异无统计学意义(P＞0.05).5组小胶质细胞ERK表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PDE4B可促进脂多糖诱导的小胶质细胞炎性因子释放,机制与激活ERK有关。
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