稳定表达Cas9蛋白的HeLa细胞系的建立

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：cuidayue

【摘要】

：

为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/m

【作者】

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刘燕飞那雷王晓钧

【机构】

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队

【出处】

：

中国预防兽医学报

【发表日期】

：

2020年9期

【关键词】

：

Cas9蛋白 HELA细胞系基因敲除效率 Cas9 proteinHeLa cell lineshigh efficiency of gene knockou

【基金项目】

：

国家自然基金青年基金(31602034),黑龙江省科学基金杰青项目(JJ2018JQ0048),黑龙江省自然科学基金面上项目(C2017077)

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为建立基于CRISPR-Cas9技术的基因敲除细胞文库,本研究利用慢病毒载体pMD2.G、pSPAX2(HIV-1的gag-pol表达质粒)和lentiCRISPR v2-Hyg包装慢病毒,感染HeLa细胞2 d后用400μg/mL潮霉素培养液筛选两周,获得稳定表达Cas9蛋白的多克隆细胞系。利用流式细胞分选系统分选及western blot鉴定获得9株HeLa-Cas9单克隆细胞系。为获得具有高效率敲除内源基因的HeLa细胞系,利用同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP sgRNA的慢病毒感染HeLa-

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