论文部分内容阅读
【目的】建立天山云杉体细胞胚成熟及萌发阶段的适宜培养条件,为该树种的体细胞胚大规模繁殖和工厂化生产提供基础。【方法】以天山云杉成熟合子胚为外植体所诱导形成的胚性愈伤组织为材料,通过14个株系、4种成熟培养基、接种量（100、150、200 mg的新鲜胚性愈伤组织）、ABA浓度(1.9、3.8、7.6、19、38μmol·L-1)等体细胞胚成熟培养条件,以及对不同起源（体细胞胚、合子胚和种子）的幼苗形态特征的比较,筛选出最优的天山云杉体细胞胚成熟与萌发条件。采用SPSS 18.0等统计软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】1)天山云杉14个株系诱导体细胞胚的结果表明,不同株系在同一成熟培养基上诱导体细胞胚的数量存在差异;其中4个株系及其接种量对体细胞胚形成数量影响的结果表明,不同株系及其接种量诱导体细胞胚的数量也存在差异,当接种量为100 mg时,T36株系的体细胞胚诱导数量最高,为3 470±546个,显著高于其他接种量和株系（P<0.05）。2)在4种不同成熟培养基上,均形成了成熟的体细胞胚,在1/2BLG+30 g·L-1麦芽糖培养基上形成的体细胞胚数量高于其他培养基,分别为2 044个（T6株系）和2 282个（T36株系）,且与其他培养基差异显著（P<0.05）。3)不同ABA浓度对天山云杉体细胞胚诱导数量的影响无显著性差异（P>0.05）,在ABA浓度为1.9～38μmol·L-1时,其体细胞胚平均诱导数量为2 850～2 913个,其中以7.6μmol·L-1 ABA的浓度处理效果较好,平均获得2 913个正常体细胞胚,高于其他处理。4)将不同起源（体细胞胚、合子胚和成熟种子）萌发的小植株进行对比,结果表明,体细胞胚和合子胚幼苗发育阶段基本一致,但合子胚的幼苗比体细胞胚的幼苗约大1倍,但二者间差异不显著（P>0.05）;体细胞胚与合子胚子叶的平均数量一致,二者无显著差异（P>0.05）,多数幼苗子叶数量为7～8个。【结论】天山云杉体细胞胚成熟阶段的适宜培养条件为胚性愈伤组织接种量100 mg,1/2BLG培养基添加7.6μmol·L-1的ABA及75%PEG4000、30 g·L-1麦芽糖,并添加750 mg·L-1的L-谷氨酰胺或50 mg·L-1 L-天冬酰胺。不同株系在诱导体细胞胚的数量上存在差异。体细胞胚再生植株与合子胚植株在形态上相似。研究结果可为天山云杉体细胞胚的大规模繁殖和工厂化生产提供基础。