论文部分内容阅读
目的 了解盐诱导激酶2(SIK2)在电离辐射诱发G2/M细胞周期阻滞中的作用,并探讨其作用机制.方法 60Coγ射线照射HeLa细胞,慢病毒载体(pSicoR)构建SIK2的小干扰RNA(shRNA)表达载体,Lipofectamine 2000介导转染构建SIK2敲低表达细胞模型.Western blot检测SIK2的蛋白表达含量,流式细胞术检测细胞周期,磷酸化组蛋白3(pH3 Ser10)作为流式细胞检测分子标记物分析G2/M期检测点功能.结果 γ射线照射能诱发HeLa细胞SIK2蛋白表达增加.成功构建shRNA敲低HeLa细胞SIK2表达的细胞模型,并通过该细胞模型观察到在不同剂量照射后(1、2、4、6 Gy)降低SIK2蛋白表达水平导致细胞的放射敏感性增高(t=-3.445、-2.581、-3.251、-2.553,P＜0.05),γ射线诱发的细胞周期G2/M边界阻滞在照后5、6h被提前解除(=4.341、6.500,P＜0.05).Western blot检测结果表明,SIK2敲低细胞与对照细胞相比,放射损伤诱发的磷酸化CHK2蛋白提前消退.结论 SIK2在细胞放射损伤反应中参与细胞的G2/M检查点功能的调节,影响细胞的放射敏感性。