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为探索敏感性高、特异性强、高通量、操作简便的羊痘病毒（CaPV）检测方法，将编码CaPV P32抗原的核苷酸序列优化为适合在Sf9细胞中表达的偏好密码子，去除氨基酸序列跨膜区，优化蛋白表达条件，利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达出了重组CaPV P32蛋白，建立了检测CaPV血清抗体的间接ELISA方法。建立的间接ELISA方法对相关的羊类病毒血清抗体无交叉反应，敏感性可达1:1 024，组内和组间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA方法，对480份临床血清样品进行抗体检测并与血清中和试验进行比对，发现两种方法的敏感性符合率为98.18%，特异性符合率为93.33%，总符合率为96.67%。本研究建立的CaPV P32血清抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可进一步开发为商品试剂盒，用于现场高通量检测，具有较好的市场应用前景。