【摘 要】
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目的 探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响.方法 采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124
【机 构】
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东南大学附属中大医院检验科,南京,210009;徐州医科大学生物学教研室,江苏徐州,221004;
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目的 探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响.方法 采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H,NFH)的表达.使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Weste blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18,ZBTB 18)的靶向关系.在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB 18或miR-124 mimics、ZBTB 18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达.结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反.miR-124可靶向调控ZBTB 18蛋白表达.在J1细胞中过表达ZBTB 18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB 18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用.结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB 18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制.
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