【摘 要】
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目的:提高抗肝癌靶向人肿瘤坏死因子(hScFv25-hTNFα)的稳定性和杀伤活性,构建二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体-突变体人TNFα融合基因(ds-ScFv-hTNFα),并在CHO细胞中表达
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071;黑龙江省海伦市妇幼保健院,海伦,152300
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目的:提高抗肝癌靶向人肿瘤坏死因子(hScFv25-hTNFα)的稳定性和杀伤活性,构建二硫键稳定的抗肝癌人源化单链抗体-突变体人TNFα融合基因(ds-ScFv-hTNFα),并在CHO细胞中表达.方法:常规构建ds-ScFv-hTNFα融合基因,并克隆入真核表达载体pCI(dhfr1),磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠卵巢细胞株(CHO-dhfr-),甲氨蝶呤(MTX)高压筛选高表达细胞株,免疫荧光染色和MTT法检测重组蛋白的抗体和突变体hTNFα的双重活性.结果:目的基因在CHO(dhfr-)中获得了表达,表达产物具有抗体和突变体hTNFα的双重活性,且稳定性得到大幅度提高,达到4℃放置4个月活性无明显下降. 结论:抗肝癌人源化ds-ScFv- hTNFα融合基因在CHO细胞中获得功能性表达,为进一步的临床应用研究奠定了基础.
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