反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

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目的 利用反向斑点杂交技术,建立结核分枝杆菌对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉索(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因突变的快速检测方法.方法 根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列,自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针,制成膜芯片,并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测.结果 在36株RFP耐药菌中,有32株被检出在rpoB基因上发生突变,突变检出率为88.89%(32/36);在39株INH耐药菌中,有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失,检出率为76.92%(30/39),;在34株SM耐药菌中,有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变,检出率为73.5%(25/34);在32株EMB耐药菌中,有19株在embB基因分析部位发生突变,检出率为59.4%(19/32).膜芯片检出的突变与基因测序结果一致.结论 用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)四种主要一线抗结核药的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可作为常规药敏方法的补充,用于指导开展早期、有效的临床化疗.
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