人HiwimiRNA干扰质粒的构建及其鉴定

来源 :实用临床医药杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yaoshikyo
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目的构建人Hiwi基因miRNA干扰质粒,探讨其对肝癌7721细胞株中Hiwi基因和蛋白表达的阻抑作用。方法根据HomosapiensHiwi基因序列,设计RNA干扰靶点,构建4对Hiwi的peDNA^TM6.2-GW/EmGFPmiRmiRNA及1对无效对照miRNA干扰质粒并将其转染至肝癌7721细胞中,通过RT—PCR和Westernblot检测7721细胞中HiwimRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了4对HiwimiRNA干扰质粒及无效干扰质粒,测序表明Hiwi干扰序列及读框完全正确。RT—P
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