【摘 要】
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目的 探讨高分辨熔解(high resolution melting,HRM)技术的常规化检测流程以及实验设计策略和具体操作要点.方法 以疾病关联SNP单位点IL1B-31和双位点IL6-597/-572的检测为例
【机 构】
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兰州大学第二医院中心实验室,兰州大学第二医院甘肃省消化系肿瘤重点实验室,兰州大学第二医院检验中心
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目的 探讨高分辨熔解(high resolution melting,HRM)技术的常规化检测流程以及实验设计策略和具体操作要点.方法 以疾病关联SNP单位点IL1B-31和双位点IL6-597/-572的检测为例,分别从核酸提取,引物设计、验证和有效性评价以及酶系统和HRM染料的选择与匹配等方面进行最优策略与流程的探索.结果成功建立了单位点IL1B-31和双位点IL6-597/-572的PCR-HRM检测方法并得到验证.柱提基因组DNA模板、特异高效HRM引物和应用热启动酶是PCR-HRM检测方法成功建立的关键,尤其是Beacon designer,uMelt和mfold等工具软件的应用.结论 HRM技术是一种适合疾病关联SNP验证和临床分子诊断的高通量、低成本、易操作、闭管均相检测新方法.
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