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摘 要：以威百亩为供试药剂，分别用沟施法及喷洒法对保护地土壤进行熏蒸处理，在熏蒸畦面土表下10cm 及 5cm处放置5种植物病源物菌株试管，熏蒸处理10d。结果表明：在粘性保护地土壤上，对10cm处的病源微生物杀灭效果低于5cm处，喷洒法用药效果优于沟施法；在土壤质地、用法及剂量相同的情况下，熏蒸期间土壤温度高则效果好。
关键词：威百亩；土壤熏蒸；保护地栽培
中图分类号 S482.6 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）16-87-03
长期以来，溴甲烷作为一种土壤熏蒸剂，在保护地种植中得到了广泛应用，由于它对害虫、线虫、真菌及细菌、杂草等农田有害生物均有较好的防治效果，同时价格相对低廉，使其成为农作物种植者防治土壤有害生物的重要“武器”，被广泛用于蔬菜、花卉、烟草等高产值作物种植前的土壤消毒[1-4]。但由于溴甲烷对大气臭氧层有破坏作用，因而，这一被多行业广泛使用的有效熏蒸剂正面临着被禁用的境地[5]。为此，开发替代溴甲烷的新型熏蒸剂已成为世界各国关注的紧迫问题[5-8]。由于土壤熏蒸剂种类繁多，不同熏蒸剂的作用机理以及对不同有害生物的作用效果往往差异很大，多种土壤熏蒸剂的杀虫及杀线虫效果往往较好，而对土壤中抗逆性较强的病原物越冬菌源的杀灭作用常常较差。因此，本试验就土壤熏蒸剂威百亩对保护地土壤上常见病害越冬菌源的杀灭效果进行了研究，现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 供试熏蒸剂 本实验所用的土壤熏蒸剂威百亩是35%的水剂，沈阳丰收农药有限公司生产，使用剂量为10mL/m2。
1.2 供试菌株 从保护地常见的茄科作物病株上分离纯化得5个纯培养菌株：疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、腐霉菌（Pythium aphanidermatum）、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）、丝核菌（Rhizoctonia solani）、炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。
1.3 病原物越冬菌源的制备
1.3.1 疫霉菌厚垣孢子的诱发 疫霉菌以厚垣孢子在土壤中越冬。厚垣孢子诱发方法如下：先将疫霉菌接种到V6培养液[9]中，25℃恒温培养7d，待其长出大量菌丝后，再将菌丝转移至无菌水中。16℃黑暗培养1个月，则可诱发菌丝产生大量厚垣孢子。
1.3.2 腐霉菌卵孢子的诱发 腐霉菌以卵孢子在土壤中越冬。卵孢子诱发方法如下：先将腐霉菌接种到PDA培养液中，25℃恒温培养7d，待其长出大量营养菌丝后，再将菌丝转移至皮氏液[9]与土壤浸出液[10]的混合液中。20℃恒温培养15d，则可诱发菌丝产生卵孢子。
1.3.3 核盘菌、丝核菌和炭疽菌的越冬菌源 核盘菌和丝核菌以菌核越冬，炭疽菌主要以菌丝体越冬，可用PDA培养基直接培养得到。
1.4 熏蒸样品的制备 熏蒸前将各菌株的越冬菌源接种到4层纱布封口的大试管斜面中，每菌株接种15支。其中12支用于掩埋熏蒸，3支用于同等土壤条件下掩埋，不熏蒸以作对照。
1.5 熏蒸土地整理 实验在合肥市南郊蔬菜产区进行，为粘盘黄棕壤，pH值7.1。被熏蒸保护地采用高埂低畦式，宽度1m，长度10m，分成3个小区。深挖（≥15cm）、碎垄（≤3cm）、整平，使地表相对湿度适中。施药后插架覆膜，沿四周用土压实封严。
1.6 熏蒸处理
1.6.1 熏蒸处理1 将熏蒸样品掩埋于苗床土壤中，深度分别为5cm和10cm，每深度每菌株2支试管。设置3次重复，并于同等土壤条件下设置对照。施药方法为土壤表面喷施：按10mL/m2用量将药剂稀释100倍，用喷壶洒在土表，待药液渗透后再用喷壶洒水覆盖。处理时土壤平均温度为7.6℃。10d后揭膜，取出试管，25℃恒温培养7d，观察各菌株成活率。
1.6.2 熏蒸处理2 施药方法为土壤沟施，在畦面上纵向开两沟，剂量同上，药剂均匀倒入沟内，再覆土掩盖。熏蒸样品掩埋于两沟之间，深度为5cm，每菌株4支试管。设置3次重复，并于同等土壤条件下设置对照。土壤平均温度为13.1℃。10d后揭膜，取出试管，25℃恒温培养7d，观察各菌株成活率。
1.6.3 熏蒸处理3 施药方法为土壤表面喷施，加水覆盖。土壤平均温度为13.3℃。其余处理方法同1.6.2。
2 结果与分析
2.1 熏蒸处理1 土壤表面喷施熏蒸剂对于掩埋深度5cm的各菌株灭菌效果比掩埋深度10cm的灭菌效果好。对于掩埋深度5cm的各菌株灭菌效果达33.3%～83.3%，而对于掩埋深度10cm的各菌株灭菌效果明显降低，灭菌效果仅为0～33.3%（见表1）。
3 结论与讨论
熏蒸处理1中，熏蒸剂土壤表面喷施对于掩埋深度5cm菌株的灭菌效果明显高于掩埋深度10cm的效果。原因是供试土壤为粘性土，质地粘结，通透性差，熏蒸剂分解的活性分子的穿透受土壤阻挡而降低了灭菌效果。因此，在粘性土壤熏蒸应相应提高用药量。
熏蒸处理2采用熏蒸剂沟施，处理3采用熏蒸剂土壤表面喷施，其它实验条件基本相同，但结果表明熏蒸剂沟施较表面喷施灭菌效果差异较大，造成这种差异的可能原因仍然是土壤的阻滞。因此，在粘性土壤上使用威百亩进行熏蒸应采取喷施法，促使药剂均匀分布，以提高熏蒸的效果。
熏蒸处理1和处理3均采用熏蒸剂土壤表面喷施加表面水覆盖用药法，在施药方法及用药量相同的条件下，对于掩埋深度均为5cm的各菌株，处理1的灭菌效果明显低于处理3。原因是两次处理的土壤平均温度不同。处理1的土壤平均温度为7.6℃，明显低于处理3的土壤平均温度13.3℃，而土壤温度既影响威百亩活性气体的形成也影响气态活性分子的扩散，在熏蒸处理1中熏蒸期间温度偏低是造成熏蒸效果不好的主要原因。因此，威百亩使用过程中应考虑土壤温度因素，如土温偏低，应适当延长熏蒸时间。
本实验将刚接种越冬菌源的试管斜面掩埋于苗床土壤下一定深度，是为了模拟病原菌混杂在土壤中越冬的状况。试管斜面采用4层纱布封口，施药后活性气体先穿透5cm的土层再透过4层纱布，才能对试管底部斜面上的病原菌起作用，这种模拟熏蒸的灭菌效果可能比熏蒸剂直接作用于混在土壤中病原菌的灭菌效果低。如果熏蒸剂直接作用于带菌土壤，应该能取得更好的灭菌效果。因此，从威百亩使用的效果来看，使用时要考虑土壤质地、温度等环境条件，采取适当的用药方法，掌握好用药时间，该药可以替代溴甲烷在保护地种植上进行土壤熏蒸。
参考文献
[1]郭振业，朱贤朝，石金开，等.溴甲烷熏蒸烟草苗床（或土壤）灭虫、防病、除草[J].中国烟草科学，1992（3）：47-49.
[2]卢江平.溴甲烷熏蒸消毒剂在烤烟苗床及营养土上的应用研究[J].烟草科技，1996（1）：39-40.
[3]木曾皓.土壤杀菌剂的有效使用法[J].植物保护，1994（1）：40.
[4]李天飞，雷丽萍，雷永和，等.溴甲烷防除烟草苗床杂草研究[J].中国烟草，1995（2）：30-40.
[5]刘治波，刘志俊，冯文萍，等.溴甲烷的禁用及其替代品的开发[J].农药，1999，38（1）：38-39.
[6]王跃进.溴甲烷及其替代技术（一）[J].植物检疫，1998，12（2）：103-106.
[7]王跃进.溴甲烷及其替代技术（二）[J].植物检疫，1998，12（3）：184-187.
[8]Miner，G.S，Worsham，D.A.Fumigation of Tobacco plant beds with Dazomet[J].Tob.Sci.，1990，34（6）：82-87.
[9]郑小波.疫霉菌研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.
[10]郑小波，陆家云.土壤浸出液刺激疫霉菌产生游动孢子囊的初步研究[J].南京农业大学学报，1990，13（4）：125-126.
（责编：陶学军）
关键词：威百亩；土壤熏蒸；保护地栽培
中图分类号 S482.6 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）16-87-03
长期以来，溴甲烷作为一种土壤熏蒸剂，在保护地种植中得到了广泛应用，由于它对害虫、线虫、真菌及细菌、杂草等农田有害生物均有较好的防治效果，同时价格相对低廉，使其成为农作物种植者防治土壤有害生物的重要“武器”，被广泛用于蔬菜、花卉、烟草等高产值作物种植前的土壤消毒[1-4]。但由于溴甲烷对大气臭氧层有破坏作用，因而，这一被多行业广泛使用的有效熏蒸剂正面临着被禁用的境地[5]。为此，开发替代溴甲烷的新型熏蒸剂已成为世界各国关注的紧迫问题[5-8]。由于土壤熏蒸剂种类繁多，不同熏蒸剂的作用机理以及对不同有害生物的作用效果往往差异很大，多种土壤熏蒸剂的杀虫及杀线虫效果往往较好，而对土壤中抗逆性较强的病原物越冬菌源的杀灭作用常常较差。因此，本试验就土壤熏蒸剂威百亩对保护地土壤上常见病害越冬菌源的杀灭效果进行了研究，现将试验结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 供试熏蒸剂 本实验所用的土壤熏蒸剂威百亩是35%的水剂，沈阳丰收农药有限公司生产，使用剂量为10mL/m2。
1.2 供试菌株 从保护地常见的茄科作物病株上分离纯化得5个纯培养菌株：疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、腐霉菌（Pythium aphanidermatum）、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）、丝核菌（Rhizoctonia solani）、炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。
1.3 病原物越冬菌源的制备
1.3.1 疫霉菌厚垣孢子的诱发 疫霉菌以厚垣孢子在土壤中越冬。厚垣孢子诱发方法如下：先将疫霉菌接种到V6培养液[9]中，25℃恒温培养7d，待其长出大量菌丝后，再将菌丝转移至无菌水中。16℃黑暗培养1个月，则可诱发菌丝产生大量厚垣孢子。
1.3.2 腐霉菌卵孢子的诱发 腐霉菌以卵孢子在土壤中越冬。卵孢子诱发方法如下：先将腐霉菌接种到PDA培养液中，25℃恒温培养7d，待其长出大量营养菌丝后，再将菌丝转移至皮氏液[9]与土壤浸出液[10]的混合液中。20℃恒温培养15d，则可诱发菌丝产生卵孢子。
1.3.3 核盘菌、丝核菌和炭疽菌的越冬菌源 核盘菌和丝核菌以菌核越冬，炭疽菌主要以菌丝体越冬，可用PDA培养基直接培养得到。
1.4 熏蒸样品的制备 熏蒸前将各菌株的越冬菌源接种到4层纱布封口的大试管斜面中，每菌株接种15支。其中12支用于掩埋熏蒸，3支用于同等土壤条件下掩埋，不熏蒸以作对照。
1.5 熏蒸土地整理 实验在合肥市南郊蔬菜产区进行，为粘盘黄棕壤，pH值7.1。被熏蒸保护地采用高埂低畦式，宽度1m，长度10m，分成3个小区。深挖（≥15cm）、碎垄（≤3cm）、整平，使地表相对湿度适中。施药后插架覆膜，沿四周用土压实封严。
1.6 熏蒸处理
1.6.1 熏蒸处理1 将熏蒸样品掩埋于苗床土壤中，深度分别为5cm和10cm，每深度每菌株2支试管。设置3次重复，并于同等土壤条件下设置对照。施药方法为土壤表面喷施：按10mL/m2用量将药剂稀释100倍，用喷壶洒在土表，待药液渗透后再用喷壶洒水覆盖。处理时土壤平均温度为7.6℃。10d后揭膜，取出试管，25℃恒温培养7d，观察各菌株成活率。
1.6.2 熏蒸处理2 施药方法为土壤沟施，在畦面上纵向开两沟，剂量同上，药剂均匀倒入沟内，再覆土掩盖。熏蒸样品掩埋于两沟之间，深度为5cm，每菌株4支试管。设置3次重复，并于同等土壤条件下设置对照。土壤平均温度为13.1℃。10d后揭膜，取出试管，25℃恒温培养7d，观察各菌株成活率。
1.6.3 熏蒸处理3 施药方法为土壤表面喷施，加水覆盖。土壤平均温度为13.3℃。其余处理方法同1.6.2。
2 结果与分析
2.1 熏蒸处理1 土壤表面喷施熏蒸剂对于掩埋深度5cm的各菌株灭菌效果比掩埋深度10cm的灭菌效果好。对于掩埋深度5cm的各菌株灭菌效果达33.3%～83.3%，而对于掩埋深度10cm的各菌株灭菌效果明显降低，灭菌效果仅为0～33.3%（见表1）。
3 结论与讨论
熏蒸处理1中，熏蒸剂土壤表面喷施对于掩埋深度5cm菌株的灭菌效果明显高于掩埋深度10cm的效果。原因是供试土壤为粘性土，质地粘结，通透性差，熏蒸剂分解的活性分子的穿透受土壤阻挡而降低了灭菌效果。因此，在粘性土壤熏蒸应相应提高用药量。
熏蒸处理2采用熏蒸剂沟施，处理3采用熏蒸剂土壤表面喷施，其它实验条件基本相同，但结果表明熏蒸剂沟施较表面喷施灭菌效果差异较大，造成这种差异的可能原因仍然是土壤的阻滞。因此，在粘性土壤上使用威百亩进行熏蒸应采取喷施法，促使药剂均匀分布，以提高熏蒸的效果。
熏蒸处理1和处理3均采用熏蒸剂土壤表面喷施加表面水覆盖用药法，在施药方法及用药量相同的条件下，对于掩埋深度均为5cm的各菌株，处理1的灭菌效果明显低于处理3。原因是两次处理的土壤平均温度不同。处理1的土壤平均温度为7.6℃，明显低于处理3的土壤平均温度13.3℃，而土壤温度既影响威百亩活性气体的形成也影响气态活性分子的扩散，在熏蒸处理1中熏蒸期间温度偏低是造成熏蒸效果不好的主要原因。因此，威百亩使用过程中应考虑土壤温度因素，如土温偏低，应适当延长熏蒸时间。
本实验将刚接种越冬菌源的试管斜面掩埋于苗床土壤下一定深度，是为了模拟病原菌混杂在土壤中越冬的状况。试管斜面采用4层纱布封口，施药后活性气体先穿透5cm的土层再透过4层纱布，才能对试管底部斜面上的病原菌起作用，这种模拟熏蒸的灭菌效果可能比熏蒸剂直接作用于混在土壤中病原菌的灭菌效果低。如果熏蒸剂直接作用于带菌土壤，应该能取得更好的灭菌效果。因此，从威百亩使用的效果来看，使用时要考虑土壤质地、温度等环境条件，采取适当的用药方法，掌握好用药时间，该药可以替代溴甲烷在保护地种植上进行土壤熏蒸。
参考文献
[1]郭振业，朱贤朝，石金开，等.溴甲烷熏蒸烟草苗床（或土壤）灭虫、防病、除草[J].中国烟草科学，1992（3）：47-49.
[2]卢江平.溴甲烷熏蒸消毒剂在烤烟苗床及营养土上的应用研究[J].烟草科技，1996（1）：39-40.
[3]木曾皓.土壤杀菌剂的有效使用法[J].植物保护，1994（1）：40.
[4]李天飞，雷丽萍，雷永和，等.溴甲烷防除烟草苗床杂草研究[J].中国烟草，1995（2）：30-40.
[5]刘治波，刘志俊，冯文萍，等.溴甲烷的禁用及其替代品的开发[J].农药，1999，38（1）：38-39.
[6]王跃进.溴甲烷及其替代技术（一）[J].植物检疫，1998，12（2）：103-106.
[7]王跃进.溴甲烷及其替代技术（二）[J].植物检疫，1998，12（3）：184-187.
[8]Miner，G.S，Worsham，D.A.Fumigation of Tobacco plant beds with Dazomet[J].Tob.Sci.，1990，34（6）：82-87.
[9]郑小波.疫霉菌研究技术[M].北京：中国农业出版社，1997.
[10]郑小波，陆家云.土壤浸出液刺激疫霉菌产生游动孢子囊的初步研究[J].南京农业大学学报，1990，13（4）：125-126.
（责编：陶学军）