【摘 要】
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目的 观察Me32aT22/2L细胞内肝豆状核变性基因(ATP7B基因)的表达是否可以转运细胞内的多余铜及纠正铜对细胞的毒性作用.为基因治疗肝豆状核变性奠定基础. 方法 采用脂质体lip
【机 构】
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中山大学附属第二医院神经科,广州市红十字会医院神经科,中山大学附属第一医院神经科
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目的 观察Me32aT22/2L细胞内肝豆状核变性基因(ATP7B基因)的表达是否可以转运细胞内的多余铜及纠正铜对细胞的毒性作用.为基因治疗肝豆状核变性奠定基础. 方法 采用脂质体lipofectamin2000,将含ATP7B cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV-WD导人Me32aT22/2L细胞内,免疫荧光检测ATP7B在细胞内的表达分布;高铜孵育培养观察外源性ATP7B的铜转运功能,以及检测ATP7B减低高铜对细胞的毒性作用. 结果 转染后的Me32aT22/2L细胞内可检测到ATP7B的表达,且分布在细胞核的周围;在高铜孵育24、48、72 h后,转染空载体组细胞内铜的含量分别为(600.60±69.71)ng/mg、(890.72±65.74)ng/mg和(1189.20±85.71)ng/mg,而表达有外源性ATP7B的细胞内铜的含量分别为(351.33±49.86)ng/mg、(427.38±30.95)ng/mg和(539.10±34.91)ng/mg,两组相比差异均有统计学意义(P,0.01);同时,与转染空载体组相比,转染ATP7B基因的细胞中的细胞凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P
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