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建立一种用超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡饲料中黄曲霉毒素B1的检测方法，并对广州市售11种鸡饲料进行了分析。试样经70%甲醇-水溶液超声提取，黄曲霉毒素B1免疫亲和柱净化；以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱，采用Waters Acquity UPLC–BEH C18柱（2.1 mm×50 mm ×1.7μm）色谱柱分离，电喷雾正离子模式进行质谱测定。结果表明：该方法的黄曲霉毒素B1检出限为0.5 ng/ mL，线性范围为0.5000～50.00 ng/ mL，相关系数为0.9937，以空白样品为基质3个加标水平下黄曲霉毒素B1的平均回收率为88.8%～93.5%，RSD<5.0%。该方法准确高效，重现性好，可实现鸡饲料中黄曲霉毒素B1的测定。