【摘 要】
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目的利用生物反应器培养技术大规模制备以MDCK细胞为基质的H5N1流感全病毒灭活疫苗,并进行免疫学评价。方法利用7. 5 L生物反应器,以5 g/L微载体培养MDCK-G1细胞,当细胞密度达到1. 5×10~6或2. 5×10~6个/mL时,以0. 001、0. 000 1、0. 000 01 MOI接种H5N1流感病毒,每12 h取样检测流感病毒血凝滴度,并观察细胞形态;利用40 L生物反应器进
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划（2010AA022463）“基于细胞培养的H1N1或其他亚型流感疫苗研究”；
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目的利用生物反应器培养技术大规模制备以MDCK细胞为基质的H5N1流感全病毒灭活疫苗,并进行免疫学评价。方法利用7. 5 L生物反应器,以5 g/L微载体培养MDCK-G1细胞,当细胞密度达到1. 5×10~6或2. 5×10~6个/mL时,以0. 001、0. 000 1、0. 000 01 MOI接种H5N1流感病毒,每12 h取样检测流感病毒血凝滴度,并观察细胞形态;利用40 L生物反应器进行放大培养,收获病毒液后进行纯化。以不同剂量的细胞基质和鸡胚基质流感疫苗免疫BALB/c小鼠及攻毒,检测免疫原性。结果当细胞密度达1. 5×10~6个/mL时,以0. 000 1 MOI接种H5N1流感病毒48 h后,流感病毒滴度可达1∶1 024。纯化后病毒液杂蛋白去除率为91. 2%,回收率为87. 9%,总蛋白与HA比值低于4. 5,符合《中国药典》三部（2015版）相关规定。各剂量组细胞基质疫苗血凝抑制试验中和抗体滴度略高于鸡胚基质疫苗,其中10μg剂量组差异无统计学意义（P＞ 0. 05）,0. 1μg剂量组差异有统计学意义（P ＜0. 01）。细胞基质疫苗及鸡胚基质疫苗组小鼠体重均有下降再恢复的过程,二者对小鼠体重的影响差异不大;1、0. 1μg剂量组细胞基质疫苗保护率为80%和40%,高于鸡胚基质疫苗的70%和30%,但差异均无统计学意义（P＞0. 05）,10μg剂量组均为100%。结论建立了以MDCK细胞为基质的H5N1流感病毒的生物反应器培养工艺,细胞基质流感病毒灭活疫苗免疫原性和安全性方面均非劣效于鸡胚基质流感疫苗,是未来流感疫苗的发展方向。本研究为细胞基质流感疫苗的研制及生产奠定了基础。
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