耻垢分枝杆菌海藻糖合成酶基因TreS的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)在环境胁迫下具有合成海藻糖的能力。实验采用PCR的方法,克隆了来源于耻垢分枝杆菌的一段核苷酸序列,与已报道的海藻糖合成酶有60%以上同源性,推测该基因的编码产物具有海藻糖合成酶的活性,为进行其功能验证而在大肠杆菌中进行了表达。目的蛋白以可溶性蛋白为主,约占细胞可溶性总蛋白48%,为目前相关报道的最高值。经活性测定,表达的重组酶无需复性,能够催化麦芽糖生成海藻糖,在20℃反应20h对麦芽糖的转化率可达61%,具有较高的应用价值。
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