【摘 要】
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运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNA NS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,
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运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNA NS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCV NS3蛋白的表达.结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCV NS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCV RNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达.该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板.
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