【摘 要】
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研究应用PCR方法扩增牛eIF5基因编码序列，通过Eco R Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-1载体，构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-eIF5，并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定
【机 构】
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东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划（863）项目（2013AAl02504-03）
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研究应用PCR方法扩增牛eIF5基因编码序列，通过Eco R Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-1载体，构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-eIF5，并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定正确后，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）大量诱导表达，利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化，SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明，原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5构建成功，Western Blot证实融合蛋白大量表达，纯化后获得GST-eIF5融合蛋白
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