【摘 要】
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目的:克隆玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因(Srt)使其在大肠杆菌XL10-Gold中高效表达,并对重组酶的酶学特性进行研究.方法:利用PCR技术从玫瑰链霉菌中克隆到一段长1 704bp的海藻糖
【机 构】
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广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530004亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院,广西南宁530004;亚热带农业生物资源保护与利用国家重点
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目的:克隆玫瑰链霉菌海藻糖合成酶基因(Srt)使其在大肠杆菌XL10-Gold中高效表达,并对重组酶的酶学特性进行研究.方法:利用PCR技术从玫瑰链霉菌中克隆到一段长1 704bp的海藻糖合成酶基因(Srt),构建重组表达质粒pSE380-Sft-treS,将其转化大肠杆菌XL10-Gold中诱导表达,对重组纯酶进行SDS-PAGE分析及酶学特性测定.结果:SDS-PAGE显示在65kDa处有明显单一蛋白条带.该酶可催化麦芽糖和海藻糖之间的可逆反应,海藻糖得率达82％,且含有很低的副产物葡萄糖(5％左右).最适反应温度和pH分别为30℃、7.5,Cu2+、Zn2+和Tris能明显抑制酶活力.该酶还可催化蔗糖生成一种无龋齿,适合糖尿病患者食用的糖类-海藻酮糖.结论:成功克隆表达了一个海藻糖合成酶基因,该酶转化率高,副产物较少,为工业酶法生产海藻糖奠定基础.
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