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摘 要 为筛选有效防止菌草食用菌病原真菌的藥剂，本研究选用7种杀菌剂对菌草食用菌4种病原真菌进行室内毒力测定。采用菌落直径法对4种病原真菌进行室内毒力测定，并计算毒力回归方程。7种供试杀菌剂对菌草食用菌4种病原真菌的作用效果中，百菌清对哈茨木霉的抑制作用最好，EC50值最小为0.291 4 mg/L；多菌灵对蜡孔菌和侧耳木霉的抑制作用最好，EC50值最小分别为0.257 mg/L和1.030 4 mg/L；精甲霜·锰锌对赭曲霉的抑制作用最好，EC50值最小为9.233 4 mg/L。百菌清、咪鲜胺、多菌灵和精甲霜·锰锌对4种病原真菌均具有较好的抑制作用，建议生产上将这4种药剂轮换使用，以有效控制菌草食用菌病害。
关键词 菌草；食用菌；杀菌剂；室内毒力测定
中图分类号 S435.673 文献标识码 A
Abstract In this study， we described the indoor toxicity of seven fungicides to four fungal pathogens of JUNCAO mushroom diseases using the method of colony diameter. The results showed that the seven fungicides had different effects on the fungal pathogens. The chlorothalonil had the best inhibitory effect on Trichoderma harzianum， and the EC50 value was 0.291 4 mg/L. Carbendazim had the best inhibitory effect on Ceriporia lacerata and Trichoderma pleuroticola， and the minimum EC50 value was 0.257 mg/L and 1.030 4 mg/L， respectively. The manganese zinc had the best inhibition effect and the EC50 value was as 9.233 4 mg/L. Chlorothalonil， carbendazim， manganese zinc could effectively control the four diseases. We suggest that the four fungicides should be used alternately.
Keywords JUNCAO mushroom； edible fungi； fungicides； toxicity
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.08.019
1983年，福建农林大学林占熺团队开展利用人工或野生草本植物代替阔叶树栽培食用菌，并于1986年获得成功，从而发明了菌草栽培食用菌技术。该技术经过30多年的推广应用，到目前已筛选45种菌草栽培55种食用菌，缓解菌业发展中的“菌林矛盾”，解决了菌业生产的可持续发展的问题[1-2]。然而无论是椴木栽培还是菌草栽培食用菌技术，随着该技术的普遍应用和推广都出现了病害危害，主要是病原菌与食用菌争夺养分和空间从而危害食用菌生长发育；通常伴有感染率高、发病率高、传播快等特点，常给菇农、工厂等造成严重损失[3-4]。目前在我国食用菌栽培种发现的竞争性杂菌就有100多种，发生在食用菌子实体上的主要包括褐腐病、褐斑病、软腐病、褐霉病等[5]，董文慧[6]利用50%咪鲜胺锰盐抑制鸡腿菇上的真菌轮枝霉和粉红聚端孢菌具有良好的抑制效果，然而选用低毒无残留的杀菌剂成为保证食用菌品质安全的主要途径[7]。根据前期的研究结果从菌草食用菌常见病害中分离得到的病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）[8]、蜡孔菌（Ceriporia lacerata）[9]、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）[10]和侧耳木霉（Trichoderma pleuroticola）[11]。
目前关于菌草食用菌中的病害未见系统、完整的研究报道，为了提高菌草食用菌生产效率，及时对病害进行治理，选择合适的杀菌剂是治理杂菌污染的快速、有效手段。但是在实际生产中长期单一、频繁的选择同一种杀菌剂对病害进行防治易导致严重的耐药性。已有研究表明，芒果[12]、油茶[13]和葡萄[14]等炭疽病因广泛使用多菌灵、甲基硫菌灵等都产生了抗药性[15-16]。因此，为防止菌草栽培食用菌种也产生抗药性，笔者参考各病原真菌的生物学特性和生产中常用的治理方法优选多菌灵、百菌清、恶霉灵等7种高效、低残留的杀菌剂对其进行室内毒力测定，以期为菌草食用菌病原真菌的科学防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试病原菌及药剂 供试4种菌草食用菌病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、蜡孔菌（Ceriporia lacerata）、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）和侧耳木霉（Trichoderma pleuroticola），均从国家菌草工程技术研究中心栽培室分离得到，经形态学及分子生物学鉴定后使用，所有菌株保存在国家菌草工程技术研究中心；供试药剂、生产厂家及药剂浓度设置见表1，药剂浓度经实际生产应用中获得。
1.1.2 供试培养基 SYM培养基：可溶性淀粉10 g，酵母提取物2 g，蔗糖3 g，琼脂粉16 g，定容至1 L。
1.2 方法
将病原菌接种至含不同浓度杀菌剂的SYM培养基中，分别于29 ℃、黑暗培养6 d后按照菌丝生长速率法测定菌落直径[17-18]，以不含药剂的SYM培养基为空白对照，每个处理5个重复，分别通过有效抑制中浓度（EC50）、毒力回归方程及斜率（R2）评价不同杀菌剂对病原菌的毒力。 1.3 数据处理与分析
采用DPS软件中几率值分析法计算不同药剂对4种病原菌菌丝生长的EC50值、毒力回归方程及R2 [19]。
2 结果与分析
2.1 7种杀菌剂对哈茨木霉的毒力测定
从表2可以看出，百菌清的EC50值最小，为0.291 4 mg/L；其次为咪鲜胺和寡糖素，EC50值分别为1.668 1 mg/L和120.458 2 mg/L；而多菌灵、恶霉灵、精甲霜和氧化钙的EC50值较大。结果表明，百菌清对哈茨木霉的抑制效果最好，精甲霜的抑制效果最差。
2.2 7种杀菌剂对蜡孔菌的毒力测定
表3是7种杀菌剂对蜡孔菌的毒力回归方程，可以看出多菌灵的EC50值最小，为0.257 0 mg/L，其次为氧化钙、咪鲜胺和百菌清，EC50值分别为1.532 3、1.666 7和1.666 7 mg/L；恶霉灵的EC50值最大，为520.084 5 mg/L。结果表明，多菌灵对蜡孔菌的抑制作为最好，恶霉灵的抑制效果最差。
2.3 7种杀菌剂对赭曲霉的毒力测定
表4是7种杀菌剂对赭曲霉的毒力测定结果，结果表明精甲霜灵·锰锌的EC50值最小，为 9.223 4 mg/L，其次为咪鲜胺和百菌清，EC50值分别为10.908 0 mg/L和25.491 2 mg/L；而氧化钙的EC50值最大，为210 663.447 0 mg/L。由此可见，精甲霜灵·锰锌和咪鲜胺对赭曲霉的抑制率较好，而氧化钙、恶霉灵等抑制效果较差。
2.4 7种杀菌剂对侧耳木霉的毒力测定
从表5可以看出，多菌灵、咪鲜胺和百菌清的EC50值较小，为1.030 4、1.099 5和1.099 5 mg/L；其次为精甲霜·锰锌，EC50值为5.856 9 mg/L；而恶霉灵、中生寡糖素和氧化钙的EC50值较大。结果表明，多菌灵、咪鲜胺和百菌清对侧耳木霉的抑制效果较好，氧化钙的抑制效果最差。
3 讨论
本文研究了7种常见的杀菌剂对菌草食用菌4种病原真菌的室内毒力测定。结果表明，7種杀菌剂对哈茨木霉（T. harzianum）的毒力强弱依次为百菌清>咪鲜胺>中生寡糖素>氧化钙>恶霉灵>多菌灵>精甲霜·锰锌，对蜡孔菌（C. lacerata）的毒力强弱依次为多菌灵>氧化钙>百菌清>咪鲜胺>精甲霜·锰锌>中生寡糖素>恶霉灵，对赭曲霉（A. ochraceus）的毒力强弱依次为精甲霜·锰锌> 咪鲜胺>百菌清>多菌灵>中生寡糖素>恶霉灵>氧化钙，对侧耳木霉（T. pleuroticola）的毒力强弱依次为多菌灵>咪鲜胺>百菌清>精甲霜·锰锌>中生寡糖素>恶霉灵>氧化钙。不同病原菌对杀菌剂的敏感性差异较大，因此在生产中针对食用菌病害有危害大、发病广、症状相似等特点，可以选择杀菌广谱、毒性低、效果显著的农药进行多病害防治。根据本研究的结果，百菌清、咪鲜胺、多菌灵和精甲霜·锰锌对4种病原菌都具有较好的抑制作用，EC50值介于0.257 0～9.223 4 mg/L之间。这4种杀菌剂对病原菌的作用方式分别为，百菌清作为一种广谱的保护性杀菌剂主要是抑制病原菌呼吸产能过程而使孢子萌发和菌丝生长受到抑制；多菌灵是抑制病原菌细胞分裂中的纺锤体的形成从而抑制菌丝的生长；精甲霜·锰锌主要是抑制病原体内丙酮酸的氧化而导致病菌死亡；咪鲜胺主要是干扰病原菌细胞壁形成而抑制其危害[20]。4种农药均具有抗菌谱较广、高效、低毒等特点，为避免病原菌产生耐药性，建议在生产中将4种杀菌剂轮换使用。
现有报道中关于椴木栽培食用菌病害的研究内容广泛，包括由特异性强的木栖柱孢霉（Schtalidium lignicola）引起的毛木耳油疤病，并发现75%百菌清（WP）、50%咪鲜胺锰盐（WP）和70%甲基硫菌灵（WP）对木栖柱孢霉的抑菌活性相对较 强[19]。杜爱玲[22]对鸡腿菇的病害研究表明，总状炭角菌成为鸡腿菇病害的主要来源之一，且具有单一的寄主，在生产过程中主要通过合理调控生长环境，改变栽培方式来控制该病害的发生。研究发现椴木栽培平菇中大量存在侧耳木霉[23-24]，且能严重影响平菇采收产量，造成巨大经济损失；然而在实际生产过程中也通常用75%酒精、新洁尔灭、84消毒液等对其进行灭菌[25]。哈茨木霉与其他食用菌相比对环境的适应能力强、生长速度快，在营养和空间上形成竞争，降低食用菌产量[26-27]。研究表明在工厂栽培真姬菇中也大量出现蜡孔菌等杂菌，并认为多菌灵对杂菌的抑制效果较明显[28]，可用于生产防治。本研究结果与已有结论相比，无论在防治椴木或菌草栽培食用菌上，均选用了较为常见的杀菌剂，然而杀菌剂对菌草食用菌生产中进行实际药效检验还需结合室内条件和生产实践，选择优良、广谱和经济的杀菌剂并推广应用。
参考文献
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关键词 菌草；食用菌；杀菌剂；室内毒力测定
中图分类号 S435.673 文献标识码 A
Abstract In this study， we described the indoor toxicity of seven fungicides to four fungal pathogens of JUNCAO mushroom diseases using the method of colony diameter. The results showed that the seven fungicides had different effects on the fungal pathogens. The chlorothalonil had the best inhibitory effect on Trichoderma harzianum， and the EC50 value was 0.291 4 mg/L. Carbendazim had the best inhibitory effect on Ceriporia lacerata and Trichoderma pleuroticola， and the minimum EC50 value was 0.257 mg/L and 1.030 4 mg/L， respectively. The manganese zinc had the best inhibition effect and the EC50 value was as 9.233 4 mg/L. Chlorothalonil， carbendazim， manganese zinc could effectively control the four diseases. We suggest that the four fungicides should be used alternately.
Keywords JUNCAO mushroom； edible fungi； fungicides； toxicity
DOI 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.08.019
1983年，福建农林大学林占熺团队开展利用人工或野生草本植物代替阔叶树栽培食用菌，并于1986年获得成功，从而发明了菌草栽培食用菌技术。该技术经过30多年的推广应用，到目前已筛选45种菌草栽培55种食用菌，缓解菌业发展中的“菌林矛盾”，解决了菌业生产的可持续发展的问题[1-2]。然而无论是椴木栽培还是菌草栽培食用菌技术，随着该技术的普遍应用和推广都出现了病害危害，主要是病原菌与食用菌争夺养分和空间从而危害食用菌生长发育；通常伴有感染率高、发病率高、传播快等特点，常给菇农、工厂等造成严重损失[3-4]。目前在我国食用菌栽培种发现的竞争性杂菌就有100多种，发生在食用菌子实体上的主要包括褐腐病、褐斑病、软腐病、褐霉病等[5]，董文慧[6]利用50%咪鲜胺锰盐抑制鸡腿菇上的真菌轮枝霉和粉红聚端孢菌具有良好的抑制效果，然而选用低毒无残留的杀菌剂成为保证食用菌品质安全的主要途径[7]。根据前期的研究结果从菌草食用菌常见病害中分离得到的病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）[8]、蜡孔菌（Ceriporia lacerata）[9]、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）[10]和侧耳木霉（Trichoderma pleuroticola）[11]。
目前关于菌草食用菌中的病害未见系统、完整的研究报道，为了提高菌草食用菌生产效率，及时对病害进行治理，选择合适的杀菌剂是治理杂菌污染的快速、有效手段。但是在实际生产中长期单一、频繁的选择同一种杀菌剂对病害进行防治易导致严重的耐药性。已有研究表明，芒果[12]、油茶[13]和葡萄[14]等炭疽病因广泛使用多菌灵、甲基硫菌灵等都产生了抗药性[15-16]。因此，为防止菌草栽培食用菌种也产生抗药性，笔者参考各病原真菌的生物学特性和生产中常用的治理方法优选多菌灵、百菌清、恶霉灵等7种高效、低残留的杀菌剂对其进行室内毒力测定，以期为菌草食用菌病原真菌的科学防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试病原菌及药剂 供试4种菌草食用菌病原真菌包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、蜡孔菌（Ceriporia lacerata）、赭曲霉（Aspergillus ochraceus）和侧耳木霉（Trichoderma pleuroticola），均从国家菌草工程技术研究中心栽培室分离得到，经形态学及分子生物学鉴定后使用，所有菌株保存在国家菌草工程技术研究中心；供试药剂、生产厂家及药剂浓度设置见表1，药剂浓度经实际生产应用中获得。
1.1.2 供试培养基 SYM培养基：可溶性淀粉10 g，酵母提取物2 g，蔗糖3 g，琼脂粉16 g，定容至1 L。
1.2 方法
将病原菌接种至含不同浓度杀菌剂的SYM培养基中，分别于29 ℃、黑暗培养6 d后按照菌丝生长速率法测定菌落直径[17-18]，以不含药剂的SYM培养基为空白对照，每个处理5个重复，分别通过有效抑制中浓度（EC50）、毒力回归方程及斜率（R2）评价不同杀菌剂对病原菌的毒力。 1.3 数据处理与分析
采用DPS软件中几率值分析法计算不同药剂对4种病原菌菌丝生长的EC50值、毒力回归方程及R2 [19]。
2 结果与分析
2.1 7种杀菌剂对哈茨木霉的毒力测定
从表2可以看出，百菌清的EC50值最小，为0.291 4 mg/L；其次为咪鲜胺和寡糖素，EC50值分别为1.668 1 mg/L和120.458 2 mg/L；而多菌灵、恶霉灵、精甲霜和氧化钙的EC50值较大。结果表明，百菌清对哈茨木霉的抑制效果最好，精甲霜的抑制效果最差。
2.2 7种杀菌剂对蜡孔菌的毒力测定
表3是7种杀菌剂对蜡孔菌的毒力回归方程，可以看出多菌灵的EC50值最小，为0.257 0 mg/L，其次为氧化钙、咪鲜胺和百菌清，EC50值分别为1.532 3、1.666 7和1.666 7 mg/L；恶霉灵的EC50值最大，为520.084 5 mg/L。结果表明，多菌灵对蜡孔菌的抑制作为最好，恶霉灵的抑制效果最差。
2.3 7种杀菌剂对赭曲霉的毒力测定
表4是7种杀菌剂对赭曲霉的毒力测定结果，结果表明精甲霜灵·锰锌的EC50值最小，为 9.223 4 mg/L，其次为咪鲜胺和百菌清，EC50值分别为10.908 0 mg/L和25.491 2 mg/L；而氧化钙的EC50值最大，为210 663.447 0 mg/L。由此可见，精甲霜灵·锰锌和咪鲜胺对赭曲霉的抑制率较好，而氧化钙、恶霉灵等抑制效果较差。
2.4 7种杀菌剂对侧耳木霉的毒力测定
从表5可以看出，多菌灵、咪鲜胺和百菌清的EC50值较小，为1.030 4、1.099 5和1.099 5 mg/L；其次为精甲霜·锰锌，EC50值为5.856 9 mg/L；而恶霉灵、中生寡糖素和氧化钙的EC50值较大。结果表明，多菌灵、咪鲜胺和百菌清对侧耳木霉的抑制效果较好，氧化钙的抑制效果最差。
3 讨论
本文研究了7种常见的杀菌剂对菌草食用菌4种病原真菌的室内毒力测定。结果表明，7種杀菌剂对哈茨木霉（T. harzianum）的毒力强弱依次为百菌清>咪鲜胺>中生寡糖素>氧化钙>恶霉灵>多菌灵>精甲霜·锰锌，对蜡孔菌（C. lacerata）的毒力强弱依次为多菌灵>氧化钙>百菌清>咪鲜胺>精甲霜·锰锌>中生寡糖素>恶霉灵，对赭曲霉（A. ochraceus）的毒力强弱依次为精甲霜·锰锌> 咪鲜胺>百菌清>多菌灵>中生寡糖素>恶霉灵>氧化钙，对侧耳木霉（T. pleuroticola）的毒力强弱依次为多菌灵>咪鲜胺>百菌清>精甲霜·锰锌>中生寡糖素>恶霉灵>氧化钙。不同病原菌对杀菌剂的敏感性差异较大，因此在生产中针对食用菌病害有危害大、发病广、症状相似等特点，可以选择杀菌广谱、毒性低、效果显著的农药进行多病害防治。根据本研究的结果，百菌清、咪鲜胺、多菌灵和精甲霜·锰锌对4种病原菌都具有较好的抑制作用，EC50值介于0.257 0～9.223 4 mg/L之间。这4种杀菌剂对病原菌的作用方式分别为，百菌清作为一种广谱的保护性杀菌剂主要是抑制病原菌呼吸产能过程而使孢子萌发和菌丝生长受到抑制；多菌灵是抑制病原菌细胞分裂中的纺锤体的形成从而抑制菌丝的生长；精甲霜·锰锌主要是抑制病原体内丙酮酸的氧化而导致病菌死亡；咪鲜胺主要是干扰病原菌细胞壁形成而抑制其危害[20]。4种农药均具有抗菌谱较广、高效、低毒等特点，为避免病原菌产生耐药性，建议在生产中将4种杀菌剂轮换使用。
现有报道中关于椴木栽培食用菌病害的研究内容广泛，包括由特异性强的木栖柱孢霉（Schtalidium lignicola）引起的毛木耳油疤病，并发现75%百菌清（WP）、50%咪鲜胺锰盐（WP）和70%甲基硫菌灵（WP）对木栖柱孢霉的抑菌活性相对较 强[19]。杜爱玲[22]对鸡腿菇的病害研究表明，总状炭角菌成为鸡腿菇病害的主要来源之一，且具有单一的寄主，在生产过程中主要通过合理调控生长环境，改变栽培方式来控制该病害的发生。研究发现椴木栽培平菇中大量存在侧耳木霉[23-24]，且能严重影响平菇采收产量，造成巨大经济损失；然而在实际生产过程中也通常用75%酒精、新洁尔灭、84消毒液等对其进行灭菌[25]。哈茨木霉与其他食用菌相比对环境的适应能力强、生长速度快，在营养和空间上形成竞争，降低食用菌产量[26-27]。研究表明在工厂栽培真姬菇中也大量出现蜡孔菌等杂菌，并认为多菌灵对杂菌的抑制效果较明显[28]，可用于生产防治。本研究结果与已有结论相比，无论在防治椴木或菌草栽培食用菌上，均选用了较为常见的杀菌剂，然而杀菌剂对菌草食用菌生产中进行实际药效检验还需结合室内条件和生产实践，选择优良、广谱和经济的杀菌剂并推广应用。
参考文献
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