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摘要：目的 ： 改进和提高千柏鼻炎片的质量标准。方法： 采用TLC法鉴别川芎、白芷、羌活、卷柏；HPLC法测定千里光中金丝桃苷的含量，色谱柱为RP-C18柱，流动相为乙腈-0.2%冰醋酸（16∶84）；检测波长为360nm。结果： 川芎、白芷、羌活、卷柏鉴别具有专属性，阴性无干扰；含量测定金丝桃苷进样量在0.0640μg～0.640μg（r=0.9995）范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为101.31%，RSD为3.30%（n=9）。结论 ： 该方法可用于千柏鼻炎片的质量控制。
关键词：千柏鼻炎片；高效液相色谱法；川芎、白芷、羌活、卷柏；千里光；金丝桃苷；质量标准
Abstract： Objective To improve the quality standard for Qianbai Biyan Tablets. Methods Chuanxiong Rhizoma， Anglicae Dahuricae Radix， Notopterygii Rhizoma et Radix， Selaginelae Herbra were identified by TLC，and Senecionis Scandentis Herbra （hyperoside） was determined by HPLC. The HPLC conditions were： RP-C18 column ， mobile phase of acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid （16∶84） and detection wavelength at 360 nm. Result The identifications of Chuanxiong Rhizoma， Anglicae Dahuricae Radix， Notopterygii Rhizoma et Radix， Selaginelae Herbra were specific. HPLC for the determination of hyperoside showed a good linear relationship in the concentration rang of 0.0640～0.640μg （r=0.9995） and the average recovery was up to 101.31%， RSD was 3.30%（n=9） . Conclusion These methods can be used for the quality control of Qianbai Biyan Tablets.
Keywords ： Qianbai Biyan Tablets； HPLC； Chuanxiong Rhizoma；Anglicae Dahuricae Radix；Notopterygii Rhizoma et Radix； Selaginela；Herbra； Senecionis Scandentis Herbra； hyperoside ；quality standard
千柏鼻炎片行销市场多年，现收载于中国药典2010版一部（1）。处方为千里光、卷柏、羌活、决明子、麻黄、川芎、白芷，常用于急、慢性鼻炎，鼻窦炎的治疗。2010版药典鉴别项下为千里光、麻黄、决明子的薄层鉴别，没有含量测定项。为了更好的控制千柏鼻炎片的质量，有必要建立完善的质量标准。
目前文献报道对千柏鼻炎片的含量测定较多（3）（4）（5），有大黄酚、盐酸麻黄碱、对羟基桂皮醛、金丝桃苷，但对鉴别没有文献报道。方中七味药现在均有成分研究。君药千里光中主要含生物碱和黄酮类化合物，中国药典2010版也有用HPLC法测定金丝桃苷的含量。我们摸索制定了川芎、白芷、羌活、卷柏的薄层鉴别方法，建立了HPLC法测定金丝桃苷的含量，提高了检验的准确性。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100系列，包括二极管阵列检测器和化学工作站（美国安捷伦公司）。色谱柱： C18柱（中科院大连化学物理研究所C18B051018，美国安捷伦公司ALLTIMA C18 、XDB-C18）。
对照药材川芎（7923-120918）、白芷（7857-120945）、羌活（164319-PCS8205）、卷柏（7091-121104）；金丝桃苷对照品（5947-1115217，供含量测定用），均来自中国药品生物制品检定所。
千柏鼻炎片为东莞市亚洲制药有限公司生产；缺川芎、白芷、羌活、卷柏、千里光的阴性样品均为按处方自制；硅胶G（青岛海洋化工厂），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 鉴别
2.1白芷的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取白芷对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。
图1 白芷TLC图谱
1、2 白芷对照药材 3、4、5 千柏鼻炎片 6、7千柏鼻炎片阴性（缺白芷）
2.2 川芎的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液，另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。 图2 川芎TLC图谱
1、2 川芎对照药材 3、4、5 千柏鼻炎片 7、8千柏鼻炎片阴性（缺川芎）
2.3 羌活的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取羌活对照药材0.5g，同法制照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。
图3 羌活TLC图谱
1、2千柏鼻炎片阴性（缺羌活） 3、4、5千柏鼻炎片 6、7、8羌活对照药材
2.4 卷柏的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加水50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加水饱和正丁醇萃取（20，20），合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液。另取卷柏对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-氨水-水（13∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干至显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图4。
图4 卷柏TLC图谱
1、2 卷柏对照药材 3、4千柏鼻炎片 5、6千柏鼻炎片阴性（缺卷柏）
3 千里光中金丝桃苷含量测定
3.1 色谱条件：色谱柱：十八烷基键合硅胶，流动相：以乙腈-0.2%冰醋酸（16∶84），流速：1mL·min-1，检测波长：360nm。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000，分离度为11.43，缺金丝桃苷阴性样品在相应保留时间处无色谱峰，无干扰，符合要求。
3.2 对照品溶液的制备：精密称取金丝桃苷适量，加75%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。
3.3供试品溶液制备 取本品细粉约2g，精密称定，置塞锥形瓶中，精密加75%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放置至室温，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
3.4 准确度：分别精密称取已知含量的千柏鼻炎片（含量为3.282 mg·g-1）9份，每份约1g，分别加入金丝桃苷对照品溶液（C=0.0320 mg·mL-1）5mL、10mL、15mL，照3.3方法供试品溶液，计算回收率，结果回收率为101.31%（RSD=3.30%）。
3.5 精密度试验
3.5.1 重复性试验 取同批千柏鼻炎片6份，照3.1～3.3项下方法操作，测定金丝桃苷的含量。金丝桃苷含量的RSD=0.70%。
3.5.2 中间精密度 取同批千柏鼻炎片细粉，3人用同一设备照含量测定项下方法操作，测定金丝桃苷的含量，中间精密度良好， 金丝桃苷含量的RSD=0.92%。
3.6 线性关系：取金丝桃苷对照品（0.0320mg·mL-1），分别精密吸取2、5、10、15、20μL注入液相色谱仪中，记录金丝桃苷峰面积，以进样量为x，峰面积为y，得线性回归方程y=2356.4x –8.4666，R=0.9995（n=5）。线性范围0.0640μg～0.640μg。
3.7 耐用性考察
3.7.1 提取方法考察：从千柏鼻炎片中提取金丝桃苷，考察了用75%甲醇回流（20min、30min、45min）、超声提取（30min、45min）、甲醇加热回流30min和超声提取30min，结果75%甲醇回流30min 测得的金丝桃苷含量最高。
3.7.2 色谱柱考察啊：分别考察了3种不同规格的色谱柱：（1）Alltech 4.6mm×250mm 5um（ALLTIMA C18 96100532）；（2）Kromasil ODS 4.6mm×200mm 5um（中科院大连化学物理研究所C18B051018）；（3）XDB-C18 4.6mm×150mm 5um（美国安捷伦），结果金丝桃苷均可基线分离，分离度稍有差异，含量测定结果的RSD为0.91%，所以认为填料为十八烷基键合硅胶，理论板数按大黄素峰计算应不低于5000即可。
3.7.3稳定性考察：取同一供试品溶液，分别于0、1、4、8、12及24小时测定峰面积，计算RSD%为0.8%。结果表明供试品溶液在24小时内稳定。
3.8 千柏鼻炎片样品测定：取不同厂家生产的千柏鼻炎片10批，测定金丝桃苷含量，平均含量为0.879mg/片。考虑到药材来源的复杂性及工业化大生产的特点，确定含量限度为每片含千里光以金丝桃苷计，应不得少于0.8mg。
4 讨论
4.1 据报道，千里光中含有蒙花苷（2）（5），但我们的TLC鉴别发现，千柏鼻炎片中几乎不含蒙花苷，所以含量测定选择了金丝桃苷。
4.2 测定千里光药材中金丝桃苷含量，并与自制千柏鼻炎片对比，计算金丝桃苷的转移率。结果表明，千里光药材中金丝桃苷从药材到成品的转移率是较低。虽然金丝桃苷微溶于水，但经过提取、制剂，含量降低是正常的，其含量的高低并不能完全代表药材的功效，因此，其转移率的高低也不能完全真实地反映药品的疗效，检测其含量只能从侧面控制产品的质量。但是转移率可以考察工艺稳定性验证。
参考文献：
1. 中华人民共和国药典委员会.中国药典（2010版第一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：32，33，97，170，210，471
2. 苗明三，等.现代实用中药质量控制技术. [S].北京：人民卫生出版社，2000：368，1048
3. 王娇.小蓟中蒙花苷对照品的制备和鉴定[J]. 现代药物与临床，2013，30（5）：767
4. 谭道鹏，桂新，王铮涛.HPLC测定千柏鼻炎片中对羟基桂皮酸和金丝桃苷的含量[J].2010，27（6）：592
5. 陈录新，马鸿雁，张勉，张朝凤，王峥涛.千里光化学成分研究.中国中药杂志[J].2006年22期
基金项目：广东省中医药管理局“建设中医药强省科研课题”，编号20121109
关键词：千柏鼻炎片；高效液相色谱法；川芎、白芷、羌活、卷柏；千里光；金丝桃苷；质量标准
Abstract： Objective To improve the quality standard for Qianbai Biyan Tablets. Methods Chuanxiong Rhizoma， Anglicae Dahuricae Radix， Notopterygii Rhizoma et Radix， Selaginelae Herbra were identified by TLC，and Senecionis Scandentis Herbra （hyperoside） was determined by HPLC. The HPLC conditions were： RP-C18 column ， mobile phase of acetonitrile-0.2% aqueous acetic acid （16∶84） and detection wavelength at 360 nm. Result The identifications of Chuanxiong Rhizoma， Anglicae Dahuricae Radix， Notopterygii Rhizoma et Radix， Selaginelae Herbra were specific. HPLC for the determination of hyperoside showed a good linear relationship in the concentration rang of 0.0640～0.640μg （r=0.9995） and the average recovery was up to 101.31%， RSD was 3.30%（n=9） . Conclusion These methods can be used for the quality control of Qianbai Biyan Tablets.
Keywords ： Qianbai Biyan Tablets； HPLC； Chuanxiong Rhizoma；Anglicae Dahuricae Radix；Notopterygii Rhizoma et Radix； Selaginela；Herbra； Senecionis Scandentis Herbra； hyperoside ；quality standard
千柏鼻炎片行销市场多年，现收载于中国药典2010版一部（1）。处方为千里光、卷柏、羌活、决明子、麻黄、川芎、白芷，常用于急、慢性鼻炎，鼻窦炎的治疗。2010版药典鉴别项下为千里光、麻黄、决明子的薄层鉴别，没有含量测定项。为了更好的控制千柏鼻炎片的质量，有必要建立完善的质量标准。
目前文献报道对千柏鼻炎片的含量测定较多（3）（4）（5），有大黄酚、盐酸麻黄碱、对羟基桂皮醛、金丝桃苷，但对鉴别没有文献报道。方中七味药现在均有成分研究。君药千里光中主要含生物碱和黄酮类化合物，中国药典2010版也有用HPLC法测定金丝桃苷的含量。我们摸索制定了川芎、白芷、羌活、卷柏的薄层鉴别方法，建立了HPLC法测定金丝桃苷的含量，提高了检验的准确性。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100系列，包括二极管阵列检测器和化学工作站（美国安捷伦公司）。色谱柱： C18柱（中科院大连化学物理研究所C18B051018，美国安捷伦公司ALLTIMA C18 、XDB-C18）。
对照药材川芎（7923-120918）、白芷（7857-120945）、羌活（164319-PCS8205）、卷柏（7091-121104）；金丝桃苷对照品（5947-1115217，供含量测定用），均来自中国药品生物制品检定所。
千柏鼻炎片为东莞市亚洲制药有限公司生产；缺川芎、白芷、羌活、卷柏、千里光的阴性样品均为按处方自制；硅胶G（青岛海洋化工厂），乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 鉴别
2.1白芷的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取白芷对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。
图1 白芷TLC图谱
1、2 白芷对照药材 3、4、5 千柏鼻炎片 6、7千柏鼻炎片阴性（缺白芷）
2.2 川芎的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液，另取川芎对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图2。 图2 川芎TLC图谱
1、2 川芎对照药材 3、4、5 千柏鼻炎片 7、8千柏鼻炎片阴性（缺川芎）
2.3 羌活的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取羌活对照药材0.5g，同法制照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述二种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇（10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图3。
图3 羌活TLC图谱
1、2千柏鼻炎片阴性（缺羌活） 3、4、5千柏鼻炎片 6、7、8羌活对照药材
2.4 卷柏的鉴别
取本品10片，除去包衣，研细，加水50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加水饱和正丁醇萃取（20，20），合并正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液。另取卷柏对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-氨水-水（13∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干至显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图4。
图4 卷柏TLC图谱
1、2 卷柏对照药材 3、4千柏鼻炎片 5、6千柏鼻炎片阴性（缺卷柏）
3 千里光中金丝桃苷含量测定
3.1 色谱条件：色谱柱：十八烷基键合硅胶，流动相：以乙腈-0.2%冰醋酸（16∶84），流速：1mL·min-1，检测波长：360nm。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000，分离度为11.43，缺金丝桃苷阴性样品在相应保留时间处无色谱峰，无干扰，符合要求。
3.2 对照品溶液的制备：精密称取金丝桃苷适量，加75%甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。
3.3供试品溶液制备 取本品细粉约2g，精密称定，置塞锥形瓶中，精密加75%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放置至室温，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
3.4 准确度：分别精密称取已知含量的千柏鼻炎片（含量为3.282 mg·g-1）9份，每份约1g，分别加入金丝桃苷对照品溶液（C=0.0320 mg·mL-1）5mL、10mL、15mL，照3.3方法供试品溶液，计算回收率，结果回收率为101.31%（RSD=3.30%）。
3.5 精密度试验
3.5.1 重复性试验 取同批千柏鼻炎片6份，照3.1～3.3项下方法操作，测定金丝桃苷的含量。金丝桃苷含量的RSD=0.70%。
3.5.2 中间精密度 取同批千柏鼻炎片细粉，3人用同一设备照含量测定项下方法操作，测定金丝桃苷的含量，中间精密度良好， 金丝桃苷含量的RSD=0.92%。
3.6 线性关系：取金丝桃苷对照品（0.0320mg·mL-1），分别精密吸取2、5、10、15、20μL注入液相色谱仪中，记录金丝桃苷峰面积，以进样量为x，峰面积为y，得线性回归方程y=2356.4x –8.4666，R=0.9995（n=5）。线性范围0.0640μg～0.640μg。
3.7 耐用性考察
3.7.1 提取方法考察：从千柏鼻炎片中提取金丝桃苷，考察了用75%甲醇回流（20min、30min、45min）、超声提取（30min、45min）、甲醇加热回流30min和超声提取30min，结果75%甲醇回流30min 测得的金丝桃苷含量最高。
3.7.2 色谱柱考察啊：分别考察了3种不同规格的色谱柱：（1）Alltech 4.6mm×250mm 5um（ALLTIMA C18 96100532）；（2）Kromasil ODS 4.6mm×200mm 5um（中科院大连化学物理研究所C18B051018）；（3）XDB-C18 4.6mm×150mm 5um（美国安捷伦），结果金丝桃苷均可基线分离，分离度稍有差异，含量测定结果的RSD为0.91%，所以认为填料为十八烷基键合硅胶，理论板数按大黄素峰计算应不低于5000即可。
3.7.3稳定性考察：取同一供试品溶液，分别于0、1、4、8、12及24小时测定峰面积，计算RSD%为0.8%。结果表明供试品溶液在24小时内稳定。
3.8 千柏鼻炎片样品测定：取不同厂家生产的千柏鼻炎片10批，测定金丝桃苷含量，平均含量为0.879mg/片。考虑到药材来源的复杂性及工业化大生产的特点，确定含量限度为每片含千里光以金丝桃苷计，应不得少于0.8mg。
4 讨论
4.1 据报道，千里光中含有蒙花苷（2）（5），但我们的TLC鉴别发现，千柏鼻炎片中几乎不含蒙花苷，所以含量测定选择了金丝桃苷。
4.2 测定千里光药材中金丝桃苷含量，并与自制千柏鼻炎片对比，计算金丝桃苷的转移率。结果表明，千里光药材中金丝桃苷从药材到成品的转移率是较低。虽然金丝桃苷微溶于水，但经过提取、制剂，含量降低是正常的，其含量的高低并不能完全代表药材的功效，因此，其转移率的高低也不能完全真实地反映药品的疗效，检测其含量只能从侧面控制产品的质量。但是转移率可以考察工艺稳定性验证。
参考文献：
1. 中华人民共和国药典委员会.中国药典（2010版第一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：32，33，97，170，210，471
2. 苗明三，等.现代实用中药质量控制技术. [S].北京：人民卫生出版社，2000：368，1048
3. 王娇.小蓟中蒙花苷对照品的制备和鉴定[J]. 现代药物与临床，2013，30（5）：767
4. 谭道鹏，桂新，王铮涛.HPLC测定千柏鼻炎片中对羟基桂皮酸和金丝桃苷的含量[J].2010，27（6）：592
5. 陈录新，马鸿雁，张勉，张朝凤，王峥涛.千里光化学成分研究.中国中药杂志[J].2006年22期
基金项目：广东省中医药管理局“建设中医药强省科研课题”，编号20121109