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摘要：目的：为提高疾控机构布病发现处置能力，加强疫情监测，管理和治疗病例，降低布病的发病率。方法：采用特异性血清学诊断技术，即虎红平板凝集试验（RBPT）初筛和试管凝集试验（SAT）确认。结果：共采集400份血样，其中共检出阳性7人，阳性率为1.8%，且全为男性。结论：采用RBPT和STA相结合的方法进行检测提高了检测速度和检测结果的准确性。
关健词：人间布氏杆菌病 虎红平板试验 试管凝集试验 准确性
【中图分类号】R392.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）03-0026-01
布氏杆菌病是由布鲁氏菌属的细菌侵入机体引起人兽共患传染病，是严重危害人类健康、阻碍畜牧业发展的传染病。布病在我国绝大多数省都有不同程度的发生和流行，人间流行以20世纪50年代及60年代最严重，70年代显著下降，90年中期及21世纪后疫情回升趋势愈加严重①。近年来平桥区疫情同全国一样呈上升态势，年发病人数达2011年来最高峰，为加强疫情监测早发现并规范管理降低布病的慢化水平，提高重点人群自我防治意识，遏制重点地区布病发病上升势头，平桥区疾控中心根据2013-2014年河南省布鲁氏菌防治实施方案，于2014年8月下旬对全区重点乡镇的畜牧养殖场、屠宰场、皮毛加工厂及散养户的高危人群进行布病的筛查工作，由疾控中心工作人员对高危人群进行采集血样，并由疾控中心实验室进行布病的血清学检测，此次调查检测共采集血样400份，其中男性367人，女性33人。现将血清学检测分析如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 被检血清：从平桥区10个重点乡镇高危人群中提前采集血清400份，并保存冰箱待检。
1.1.2 试剂：虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原由市疾控中心统一从中国疾病预防控制中心传染病预防控制所购进，批号为201401，灭菌生理盐水，所有试剂在保质期内使用。
1.1.3 主要仪器和器材：清洁脱脂玻片、中试管、加样枪、吸头、试管架、玻璃杯、1mL、10mL吸管、恒温培养箱等。
1.1.4 检验方法及判断标准：按照卫生部疾病预防控制局编著的《布鲁氏菌病防治手册》规定的检验方法，虎红平板凝集试验进行初筛，对初筛阳性和可凝者作试管凝集试验确认，滴度为1：100及以上方可确诊为阳性。
1.2 试验方法
1.2.1 虎红平板凝集实验（RBPT）：原理：虎红平板凝集试验又称班氏孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM抗体的凝集活性，查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。方法：在玻片上加0.03mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03mL，充分混匀，在5分钟内观察结果，出现可见凝集反应就判断阳性。
1.2.2 试管凝集反应（SAT）：
1.2.2.1 将每份初筛阳性和可疑者的血清取6支小试管，放于试管架上；第一支管加生理盐水2.3mL，第二支不加，第三支到第五支各加0.5mL生理盐水，然后用加样枪取0.2mL被检血清加入第一管中混匀后各取0.5mL加入二、三管中，第三管混匀后再吸0.5mL加入第四管中，以此类推到第五管吸0.5mL弃去，此时血清稀释倍数从第二管开始到第五管分别为1：12.5、1：25、1：50、1：100。
1.2.2.2 将试管凝集抗原充分混匀后，做10倍稀释，然后从第二管开始每管加入0.5mL，加入抗原后，血清最终稀释倍数从第二管开始为1：25、1：50、1：100、1：200，第一管为血清对照，第六管为抗原对照。然后充分混匀，放于37℃恒温箱中20～22小时取出，在室温放置1～2小时后观察结果。
1.2.2.3 阳性、阴性对照稀释和加抗原的方法与受检血清相同，做抗原对照的目的是观察抗原是否有自凝现象。为判定准确，同时制备凝集试验标准比浊管，作为判定透明程度的依据。判断标准是1：100（++）及以上者为阳性，1：50为可疑。
2 结果
2.1 虎红平板凝集试验：阳性7份，可疑4份。
2.2 试管凝集试验：阳性7份，阳性率为1.8%。
2.3 阳性分布：全为男性，年龄在20～60岁之间，其中有7个乡镇检出。
3 分析与讨论
3.1 国外采用虎红平板凝集试验（RBPT）检测布病获得满意结果，试管凝集试验（STA）一直是各国用做布病的常规血清学诊断方法，实践证明RBPT简便、快速、容易操作，适用基层大面积检测，但其特异性不高，受试验温度、凝集时间相对较短，人为主观因素的影响，不易准确判定结果，只能作为初筛；而STA是比较稳定、特异且敏感的方法，可检测血清中抗布鲁氏菌IgG、IgM、IgA三类免疫球蛋白抗体，且操作简便，判定容易的特点，具有较高的诊断价值。因此，采用RBPT和STA相结合的方法进行检测更加提高了检测结果的准确度②。
3.2 在实验过程中，受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10℃，采血后应于3～4日内进行检测，放置时间过长会导致血清效价降低。在实验操作时严格遵守实验规程，所用器材要清洁、干燥，试剂的加量一定要正确，放入恒温箱的温度和时间都按要求，否则都影响结果。同时要有实验对照。
3.3 从检测结果来看，布病阳性的全为男性，以青壮年为主，地区分布呈散发，都是畜牧养殖人员，由此可见，布病与职业有密切关系。在养殖业里，由于其职业的特殊性，男性较女性多，且女性在生活细节上较男性认真仔细；他们在饲养过程中与畜之间接触频繁、密切，从而增加了人类感染的机会，特别是产羔季节，接羔助产中不注重防范，意识差，病羊流产物、排泄物污染环境中，极易造成人间布病的流传。
3.4 通过上述两种方法，检测出阳性患者，说明平桥区养殖业里确实存在人布鲁氏菌病的感染。布病如不及时治疗，易由急性转为慢性，反复发作，严重影响健康和劳动能力，甚至终生不愈，因此，早发现，早检测，对布病的防治尤其重要。
参考文献
[1] 卫生部疾病预防控制局.布鲁氏菌病防治手册（M）.人民卫生出版社.2008.
[2] 冯元璋.血清学技术在布病诊断的应用研究现状及评价（J）仲恺农业技术学报.1997.10（1）79-87.
关健词：人间布氏杆菌病 虎红平板试验 试管凝集试验 准确性
【中图分类号】R392.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）03-0026-01
布氏杆菌病是由布鲁氏菌属的细菌侵入机体引起人兽共患传染病，是严重危害人类健康、阻碍畜牧业发展的传染病。布病在我国绝大多数省都有不同程度的发生和流行，人间流行以20世纪50年代及60年代最严重，70年代显著下降，90年中期及21世纪后疫情回升趋势愈加严重①。近年来平桥区疫情同全国一样呈上升态势，年发病人数达2011年来最高峰，为加强疫情监测早发现并规范管理降低布病的慢化水平，提高重点人群自我防治意识，遏制重点地区布病发病上升势头，平桥区疾控中心根据2013-2014年河南省布鲁氏菌防治实施方案，于2014年8月下旬对全区重点乡镇的畜牧养殖场、屠宰场、皮毛加工厂及散养户的高危人群进行布病的筛查工作，由疾控中心工作人员对高危人群进行采集血样，并由疾控中心实验室进行布病的血清学检测，此次调查检测共采集血样400份，其中男性367人，女性33人。现将血清学检测分析如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 被检血清：从平桥区10个重点乡镇高危人群中提前采集血清400份，并保存冰箱待检。
1.1.2 试剂：虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原由市疾控中心统一从中国疾病预防控制中心传染病预防控制所购进，批号为201401，灭菌生理盐水，所有试剂在保质期内使用。
1.1.3 主要仪器和器材：清洁脱脂玻片、中试管、加样枪、吸头、试管架、玻璃杯、1mL、10mL吸管、恒温培养箱等。
1.1.4 检验方法及判断标准：按照卫生部疾病预防控制局编著的《布鲁氏菌病防治手册》规定的检验方法，虎红平板凝集试验进行初筛，对初筛阳性和可凝者作试管凝集试验确认，滴度为1：100及以上方可确诊为阳性。
1.2 试验方法
1.2.1 虎红平板凝集实验（RBPT）：原理：虎红平板凝集试验又称班氏孟加拉红平板凝集试验，由于所用的抗原是酸性带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM抗体的凝集活性，查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。方法：在玻片上加0.03mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03mL，充分混匀，在5分钟内观察结果，出现可见凝集反应就判断阳性。
1.2.2 试管凝集反应（SAT）：
1.2.2.1 将每份初筛阳性和可疑者的血清取6支小试管，放于试管架上；第一支管加生理盐水2.3mL，第二支不加，第三支到第五支各加0.5mL生理盐水，然后用加样枪取0.2mL被检血清加入第一管中混匀后各取0.5mL加入二、三管中，第三管混匀后再吸0.5mL加入第四管中，以此类推到第五管吸0.5mL弃去，此时血清稀释倍数从第二管开始到第五管分别为1：12.5、1：25、1：50、1：100。
1.2.2.2 将试管凝集抗原充分混匀后，做10倍稀释，然后从第二管开始每管加入0.5mL，加入抗原后，血清最终稀释倍数从第二管开始为1：25、1：50、1：100、1：200，第一管为血清对照，第六管为抗原对照。然后充分混匀，放于37℃恒温箱中20～22小时取出，在室温放置1～2小时后观察结果。
1.2.2.3 阳性、阴性对照稀释和加抗原的方法与受检血清相同，做抗原对照的目的是观察抗原是否有自凝现象。为判定准确，同时制备凝集试验标准比浊管，作为判定透明程度的依据。判断标准是1：100（++）及以上者为阳性，1：50为可疑。
2 结果
2.1 虎红平板凝集试验：阳性7份，可疑4份。
2.2 试管凝集试验：阳性7份，阳性率为1.8%。
2.3 阳性分布：全为男性，年龄在20～60岁之间，其中有7个乡镇检出。
3 分析与讨论
3.1 国外采用虎红平板凝集试验（RBPT）检测布病获得满意结果，试管凝集试验（STA）一直是各国用做布病的常规血清学诊断方法，实践证明RBPT简便、快速、容易操作，适用基层大面积检测，但其特异性不高，受试验温度、凝集时间相对较短，人为主观因素的影响，不易准确判定结果，只能作为初筛；而STA是比较稳定、特异且敏感的方法，可检测血清中抗布鲁氏菌IgG、IgM、IgA三类免疫球蛋白抗体，且操作简便，判定容易的特点，具有较高的诊断价值。因此，采用RBPT和STA相结合的方法进行检测更加提高了检测结果的准确度②。
3.2 在实验过程中，受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10℃，采血后应于3～4日内进行检测，放置时间过长会导致血清效价降低。在实验操作时严格遵守实验规程，所用器材要清洁、干燥，试剂的加量一定要正确，放入恒温箱的温度和时间都按要求，否则都影响结果。同时要有实验对照。
3.3 从检测结果来看，布病阳性的全为男性，以青壮年为主，地区分布呈散发，都是畜牧养殖人员，由此可见，布病与职业有密切关系。在养殖业里，由于其职业的特殊性，男性较女性多，且女性在生活细节上较男性认真仔细；他们在饲养过程中与畜之间接触频繁、密切，从而增加了人类感染的机会，特别是产羔季节，接羔助产中不注重防范，意识差，病羊流产物、排泄物污染环境中，极易造成人间布病的流传。
3.4 通过上述两种方法，检测出阳性患者，说明平桥区养殖业里确实存在人布鲁氏菌病的感染。布病如不及时治疗，易由急性转为慢性，反复发作，严重影响健康和劳动能力，甚至终生不愈，因此，早发现，早检测，对布病的防治尤其重要。
参考文献
[1] 卫生部疾病预防控制局.布鲁氏菌病防治手册（M）.人民卫生出版社.2008.
[2] 冯元璋.血清学技术在布病诊断的应用研究现状及评价（J）仲恺农业技术学报.1997.10（1）79-87.