【摘 要】
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目的分析肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)收获液中的蛋白成分,为该类疫苗的研发及质控提供参考。方法将EV71安徽阜阳株接种于Vero细胞,病毒培养72 h后,收获病毒液,经蔗糖
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目的分析肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)收获液中的蛋白成分,为该类疫苗的研发及质控提供参考。方法将EV71安徽阜阳株接种于Vero细胞,病毒培养72 h后,收获病毒液,经蔗糖密度梯度超滤离心、甲醛灭活、DEAE Sephorase FF介质离子交换层析纯化,获得纯化样品。应用透射电镜分析样品中病毒颗粒的形态;对非还原型SDS-PAGE检测疑似病毒衣壳抗原蛋白VP1和VP3条带进行N-末端氨基酸序列分析;液相色谱(liquid chromatography,LC)与电喷雾电离质谱(electrospray ionization,ESI-MS)结合的方法分析样品中所含的蛋白成分。结果纯化的EV71样品在透射电镜下可观察到20~30 nm的球形EV71颗粒,呈典型的肠道病毒形态;经SDS-PAGE分析,第2和第3条带所在位置与文献报道的EV71衣壳蛋白VP1和VP3大小相符,N-末端氨基酸序列与GenBank报道的安徽阜阳株序列(ACD63039.1)一致;LC/ESI-MS质谱分析显示,纯化EV71样品中病毒蛋白成分占绝对优势,包括EV71的蛋白多聚体、VP1、VP2、VP3、VP4蛋白。结论对EV71疫苗制备过程中病毒收获液的蛋白成分进行了初步分析,为该类疫苗的研发及质控提供了参考。
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