【摘 要】
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目的 研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于结直肠癌细胞不同时间,富集肿瘤干细胞的效果.方法 结直肠癌DLD-1细胞分别在含5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL bFGF的无
【机 构】
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川北医学院附属医院 肝胆外科二/肿瘤干细胞研究中心,四川 南充,637000
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目的 研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于结直肠癌细胞不同时间,富集肿瘤干细胞的效果.方法 结直肠癌DLD-1细胞分别在含5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL bFGF的无血清培养基中悬浮培养,分为G1、G2、G3组,设置培养时间梯度为10 d、20 d、30 d,获得球细胞.采用流式细胞术(FCM)检测细胞球中的CD44+、CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达比例,Real-time PCR检测球细胞中的干细胞基因(KLF4、Nanog);上皮间质转化基因(E-cadherin、Snail);Wnt/β-catenine通路基因(Wnt-3a)的mRNA表达情况,成球实验检测细胞球的自我更新能力.结果 FCM检测结果:CD44+阳性表达的细胞表达以G2组20 d最高,CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达均以G2组20 d及G3组10 d最高,差异有统计学意义(F=98.895、147.641、13.321,P<0.05).Real-time PCR检测结果:各组中KLF4、Nanog、Snail以及Wnt-3a mRNA的表达均以G2组20 d表达最高(F=2.424、7.694、2.951、3.771,均P<0.05),E-cadherin基因G2组20 d mRNA表达最低(G2组30 d、G1组10 d除外)(F=10.620,P<0.05).成球实验结果:各组比较G1组20 d和G2组20 d成球数量明显多于其他组,差异具有统计学意义(F=14.279,P<0.01);但G1组20 d和G2组20 d比较,无统计学差异(t=0.605,P=0.578).结论 碱性成纤维细胞生长因子无血清悬浮培养能够有效富集肿瘤干细胞,其中G2组培养20 d较其余组能更有效地富集结直肠癌肿瘤干细胞.
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