观察神经轴突导向分子Slit3及其受体Robo在小鼠主动脉平滑肌细胞(MASMC)中的表达,并探讨外源性Slit3蛋白对MASMC增殖和迁移的作用。
方法体外原代培养并采用免疫荧光法鉴定MASMC,采用逆转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学法检测Slit3/Robo信号通路在MASMC的表达情况。将细胞分为6组:阴性对照组(DMEM培养基中含牛血清白蛋白86 μg/L)、Slit3 0 μg/L组(DMEM培养基中无Slit3)、Slit3 24 μg/L组(DMEM培养基中含Slit3 24 μg/L)、Slit3 40 μg/L组(DMEM培养基中含Slit3 40 μg/L)、Slit3 80 μg/L组(DMEM培养基中含Slit3 80 μg/L)和阳性对照组(DMEM培养基中含血小板源性生长因子10 μg/L)。采用CCK-8法分析Slit3对MASMC增殖的作用,采用细胞划痕法和Transwell小室检测Slit3对MASMC迁移的作用。
结果(1)MASMC上有Slit2、Slit3、Robo1、Robo4 mRNA及蛋白的表达,Slit2的mRNA表达水平低于Slit3 (P<0.05),受体Robo1与Robo4的mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Slit3 24 μg/L组、Slit3 40 μg/L组、Slit3 80 μg/L组的MASMC增殖活性均高于阴性对照组(分别为1.13±0.04、1.19±0.02、1.18±0.08和0.64±0.10,P均<0.05),Slit3 40 μg/L组的MASMC增殖活性与阳性对照组(1.27±0.05)比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)细胞划痕实验显示,Slit3 24 μg/L组、Slit3 40 μg/L组、Slit3 80 μg/L组的细胞划痕宽度均小于阴性对照组[分别为(0.40±0.03) cm、(0.32±0.03) cm、(0.30±0.02) cm和(0.49±0.01) cm,P均<0.05],Slit3 80 ng/ml组与阳性对照组[(0.22±0.01) cm]的细胞划痕宽度差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell小室实验显示,Slit3 24 μg/L组、Slit3 40 μg/L组、Slit3 80 μg/L组的MASMC跨膜迁移数量均多于阴性对照组[细胞跨膜迁移数量分别为(46.67±2.23)个、(65.33±3.43)个、(81.67±4.22)个和(39.33±2.03)个,P均<0.05],Slit3 80 μg/L组与阳性对照组[(84.00±2.02)个]的MASMC跨膜迁移数量差异无统计学意义(P>0.05)。
结论MASMC上有Slit2、Slit3、Robo1和Robo4的表达,外源性Slit3可促进MASMC的增殖和迁移。