Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究

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目的获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应. 方法从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定.重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化. 结果 RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段.原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组.高效液相色谱结果表明,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高(P<0.01),细胞外HVA、DOPAC降低(P<0.05),而胞内升高(P<0.01). 结论克隆的VMAT2 cDNA片段可在真核细胞中表达,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗.
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