【摘 要】
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为揭示猪链球菌抗氧化应激的机制,采用比较蛋白组学方法,鉴定猪链球菌抗氧化应激相关蛋白。提取猪链球菌全菌蛋白,以THB培养基培养的细菌作为对照,经H2O2处理后,液相色谱-串
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(31872469)
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为揭示猪链球菌抗氧化应激的机制,采用比较蛋白组学方法,鉴定猪链球菌抗氧化应激相关蛋白。提取猪链球菌全菌蛋白,以THB培养基培养的细菌作为对照,经H2O2处理后,液相色谱-串联质谱共鉴定出54个差异表达蛋白,其中28个蛋白在H2O2处理组中上调表达,26个蛋白下调表达。这些差异表达的蛋白主要参与代谢、生物合成、抗应激等过程。深入分析,发现7个新的蛋白可能参与猪链球菌抗氧化应激;从中选择在H2O2处理组显著上调表达的2个蛋白YbaB/EbfC家族核苷相关蛋白(YED)和2-氨基-4-羟基-6-羟甲基二氢蝶啶二磷酸激酶(AHH)进行验证。分别构建二者缺失株ΔYED和ΔAHH;生长曲线分析表明,2个缺失株在THB培养基中生长与野生株相似;氧化应激试验表明,经H2O2作用后,野生株存活率为97.12%,而ΔYED与ΔAHH则显著降低,分别为72.69%(P<0.05)和79.49%(P<0.05);小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬与存活试验表明,RAW264.7对野生株和2个缺失株的吞噬率无显著差异,但与野生株相比,2个缺失株在RAW264.7内的存活率均显著降低。本研究鉴定的与氧化应激相关的差异表达蛋白,有助于揭示猪链球菌的抗氧化应激机制,其中YED和AHH与猪链球菌在吞噬细胞内存活相关,提示它们在猪链球菌致病过程中发挥作用。
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