【摘 要】
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目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用.方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGF
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目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用.方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中.用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP).利用T7RNA转录试剂盒,制备可抑制GFP基因表达的siRNA(GFPsiRNA)和无关对照的RNA(control siRNA).用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中.继续培养48 h后,检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平.结果:用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株,可以观察到GFP的稳定表达.HUVEC-GFP转化siRNA后48 h,GFP的荧光强度明显下降,而对照组的荧光强度无明显下降.半定量RT-PCR检测显示,GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用,抑制率达40%,而control siRNA对GFPmuRNA表达水平无明显的抑制作用.结论:利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达.
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