人ICA69基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达与应用初探

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目的:用基因工程技术在大肠杆菌中表达国人胰岛细胞自身抗原69kd蛋白(hICA69),获得足量的、可供实验研究的ICA69抗原,用于I型糖尿病的早期诊断和联合筛查。方法:用PCR法扩增出编码hICA69的cDNA片段,直接克降到pSPORT1质粒上,经DNA序列测定后,再插入到GST融合蛋白表达载体pGEX-2T的EcoRI和SmaI位点之间,构成重组质粒p25-hICA69,将此质粒导入大肠杆菌,经IPIG诱导后获得GST-hICA69融合蛋白的表达产物,用间接ELISA法检测100例正常人和30例I型
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