【摘 要】
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目的 研究神经轴突导向因子受体(Robo4)对血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响.方法 建立了体外BTB模型,应用Real-time PCR和Western blot检测Robo4在正常人脑微血管内皮细胞和胶质瘤微血管内皮细胞中的表达变化.设计合成针对Robo4基因的小干扰RNA,转染至人脑微血管内皮hCMEC/D3细胞,下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Robo4的表达,跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗透试验分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测hCMEC/D3细胞中紧密连接
【机 构】
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中国医科大学 附属第一医院神经内科,沈阳,110001;中国医科大学 附属盛京医院神经外科,沈阳,110001;中国医科大学 基础医学院神经生物学教研室,沈阳,110001
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目的 研究神经轴突导向因子受体(Robo4)对血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响.方法 建立了体外BTB模型,应用Real-time PCR和Western blot检测Robo4在正常人脑微血管内皮细胞和胶质瘤微血管内皮细胞中的表达变化.设计合成针对Robo4基因的小干扰RNA,转染至人脑微血管内皮hCMEC/D3细胞,下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞中Robo4的表达,跨内皮电阻测量系统和辣根过氧化物酶渗透试验分析血肿瘤屏障通透性变化;Western blot和免疫荧光法检测hCMEC/D3细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达和分布变化.结果 和正常人脑微血管内皮细胞相比,Robo4在胶质瘤微血管内皮细胞中的表达显著上调.下调体外血肿瘤屏障模型内皮细胞Robo4的表达后,TEER值显著降低,辣根过氧化物酶透过率显著增高;同时胶质瘤微血管内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达显著降低,在细胞膜上呈不连续分布.结论 RNA干扰沉默Robo4表达能够显著降低紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达,增加BTB通透性.
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