【摘 要】
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利用简并PCR结合染色体步移法首次克隆获得粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶(ACC)基因的全长序列信息。序列分析表明,该基因包含2个内含子,分别位于42～147 bp和315～677 bp处,编码区域总
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室微生物农药国家工程研究中心
【基金项目】
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国家转基因生物新品种培育重大专项课题（2009ZX08009-120B）
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利用简并PCR结合染色体步移法首次克隆获得粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶(ACC)基因的全长序列信息。序列分析表明,该基因包含2个内含子,分别位于42～147 bp和315～677 bp处,编码区域总长为6 801bp,推导的氨基酸序列进行二级结构分析具备乙酰辅酶A羧化酶典型的3个功能域:生物素羧化酶(BC)、生物素羧基载体蛋白(BCCP)和羧基转移酶(CT)。克隆该基因的CT功能域基因,连接到原核表达载体pET-28a上,在Escherichia coli BL21(DE3)中成功表达,利用Ni-NTA树脂柱纯化获得CT的可溶性重组蛋白,浓度为1.8mg/mL,为研究ACC的功能和针对CT作用的除草剂机理研究提供了有价值的材料。
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