【摘 要】
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目的 探讨HepG2细胞中HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HCV IRES启动蛋白翻译的影响,以了解HCV的复制调控机制.方法 将构建的表达双荧光素酶的双顺反子载体pCMVRluc-IRES-Fluc和含HCV
【机 构】
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重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金;重庆市自然科学基金
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目的 探讨HepG2细胞中HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HCV IRES启动蛋白翻译的影响,以了解HCV的复制调控机制.方法 将构建的表达双荧光素酶的双顺反子载体pCMVRluc-IRES-Fluc和含HCV NS5A基因的表达质粒pcDNA-NS5A共转染HepG2细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶的表达水平,细胞免疫荧光技术检测HCV NS5A蛋白的表达,RT-PCR检测虫荧光素酶基因mRNA水平,并与相应对照做比较,以观察HCV NS5A对HCV IRES介导虫荧光素酶翻译水平的影响. 结果转染pcDNA-NS5A的HepG2细胞中虫荧光素酶活性明显高于转染pCDNA3.1-3flag的对照组,并存在剂量依赖关系;而RT-PCR虫荧光素酶基因mRNA水平在两组间差异无统计学意义.转染pcDNA-NS5A的HepG2细胞质中可见HCV NS5A蛋白的表达. 结论HCV NS5A蛋白对HCV IRES介导虫荧光素酶的翻译有正调节作用,并存在剂量依赖关系.
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