【摘 要】
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目的研究人白细胞介素4(IL-4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制. 方法以逆转录病毒为载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞.台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL-4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc 表达的变化.流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法及间接免疫荧
【机 构】
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深圳市儿童医院,重庆医科大学附属儿童医院
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目的研究人白细胞介素4(IL-4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制. 方法以逆转录病毒为载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞.台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL-4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc 表达的变化.流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p53、bcl-2的蛋白表达. 结果 (1) 人IL-4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0/G1期阻滞,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc表达降低(P＜0.001).细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化;(2) 较空载体修饰及野生型HepG2细胞,IL-4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征,流式细胞仪亦检测到18.5%±4.7%的凋亡细胞;(3) 人IL-4基因修饰增加p53而抑制bcl-2表达(P＜0.05). 结论人IL-4 基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化,诱导凋亡细胞可能与上调p53蛋白及抑制bcl-2蛋白表达有关.
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