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目的
明确新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)包膜糖蛋白血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase, HN)头颈部相互作用区91~112氨基酸(aa)片段的功能,阐明该区域促进细胞特异性膜融合的作用。
方法比对NDV HN 91~112 aa与MeV H、RSV G、hPIV3 HN,确定吸附蛋白相应的基因序列,采用片段缺失、置换和同源重组技术,构建NDV HN缺失突变体De(HN)和嵌合体Ch(MeV)、Ch(RSV)、Ch(hPIV3);痘苗病毒-T7瞬时表达系统在真核细胞BHK-21内表达各突变体;间接免疫荧光法和流式细胞术分析各突变体蛋白在细胞表面的表达情况;蛋白功能试验分别测定各突变体蛋白的促细胞融合活性、受体识别活性和神经氨酸酶活性。
结果De(HN)和Ch(MeV)、Ch(RSV)、Ch(hPIV3)的细胞表面表达效率分别为野生型的9.04%、82.20%、70.16%和75.65%;促细胞融合活性分别为野生型的3.83%、24.76%、29.42%和57.84%(P均<0.05),其中De(HN)的促细胞融合活性基本消失,镜下未观察到合胞体形成;受体识别活性分别为野生型的13.48%、36.25%、34.93%和65.22%(P均<0.05),与促细胞融合活性具有一致性;神经氨酸酶活性分别为野生型的10.81%、54.42%、50.13%和60.35%(P均<0.05)。
结论NDV HN蛋白91-112 aa对膜融合功能有重要影响,缺失突变体膜融合功能的消失与其未能在细胞表面有效表达有关。