海岛棉组培mRNA差异显示体系的建立

来源 :新疆农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:whynot2009
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【目的】建立适合海岛棉组织培养过程中差异基因表达研究的DDRT-PCR体系。【方法】试验选取海岛棉体胚发育过程中的胚性愈伤组织,无菌苗下胚轴为对照。对引物浓度、dNTP浓度、酶浓度和退火温度等影响差异显示PCR的关键因素进行单因素优化实验。【结果】确定了海岛棉组织培养差异显示PCR体系为(10μL):cDNA 2μL;dNTP 200μmol/L;上游引物0.4μL(10μM),下游引物0.5μL(10μM);Taq酶0.5 U,Buffer1.0μL。前5个循环退火温度为50℃,后30个循环退火温度为5
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