构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155，探讨其在乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠中对HBV复制及PTEN基因表达的调控作用。
方法PCR扩增mmu-miR-155的前体基因片段（pre-mmu-miR-155），双酶切后连接到pmR-mCherry载体上，通过菌落PCR、双酶切和测序验证重组载体的准确性。将重组载体采用高压尾静脉法注入HBV转基因小鼠体内作为实验组，同时设空质粒组（注入pmR-mCherry空质粒）、空白组（注入等体积磷酸盐缓冲液），7 d后qPCR检测各组细胞miR-155的表达情况，14 d采用酶联免疫吸附法检测干扰素（IFN）γ表达量；1个月后qPCR检测肝内细胞因子信号抑制物（SOCS）1、PTEN基因mRNA表达量及Western blot检测肝内SOCS1、PTEN、HBX蛋白表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验；三组数据比较采用方差分析，进一步两两比较采用LSD法。
结果经菌落PCR、双酶切和测序证实，pre-mmu-miR-155基因片段成功插入pmR-mCherry载体中。注入质粒7 d后，实验组表达miR-155的水平明显升高（t = 8.90，P < 0.01）；注入质粒14 d后，实验组IFNγ表达量较空白组升高（F = 26.58，P < 0.01）；注入质粒30 d后，实验组肝内SOCS1、PTEN mRNA（FSOCS1 mRNA = 19.72，P < 0.01；FPTEN mRNA = 7.38，P < 0.05)及蛋白表达水平(FSOCS1 = 50.30，P < 0.01；FPTEN = 129.00, P < 0.01)均下降，同时HBX表达水平下降(FHBX = 77.97，P < 0.01)。
结论成功构建mmu-miR-155真核过表达载体pmR-155，该重组载体可稳定表达mmu-miR-155；miR-155可以通过下调SOCS1表达，进而促进IFNγ的表达，增强HBV转基因小鼠的抗HBV能力。与此同时，miR-155可下调PTEN的表达，有潜在的促进肝癌发生的可能。