丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

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为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog(MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件;采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明:(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS+0.5mg·L-16-BA+0.5 mg·L-12,4-D;诱导茎较快产生愈伤的是MS+0.1mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA;1 mg·L-1反式玉米素(ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织;1.0 mg·L-12,4-D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg·L-1筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60%;而用10 mg·L-1链霉素筛选阳性率达70%。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg·L-1链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。
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