【摘 要】
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目的构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,研究过表达CXCL1对内质网应激(ERS)下肝癌细胞增殖作用。方法以Hep G2细胞的c DNA文库为模板,通过PCR扩增CXCL1编码序列,并将其插入pEGF
【机 构】
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吉林大学中日联合医院; 湘南学院附属医院; 广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科; 中国人民武装警察部队总医院检验科; 军事医学科学院生物工程研究所;
【基金项目】
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广西卫生和计划生育委员会重点课题资助项目(S201513);区域性高发肿瘤早期防治重点实验室子课题资助项目(GKZ201604);广西科学技术厅重点研发课题资助项目(桂科AB16380242)
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目的构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,研究过表达CXCL1对内质网应激(ERS)下肝癌细胞增殖作用。方法以Hep G2细胞的c DNA文库为模板,通过PCR扩增CXCL1编码序列,并将其插入pEGFP-C1空载体,构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,随后将其瞬时转染到293T细胞中,通过荧光显微镜和蛋白质免疫印迹法检测CXCL1在真核细胞中的表达情况,将pEGFP-C1-CXCL1转染至Hep G2细胞中,CCK8检测CXCL1对TM诱导下的ERS肿瘤增殖的抑制作用。结果菌液PCR和测序结果均证实得到pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,其转染293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,免疫印迹表明CXCL1在293T细胞中表达,CCK8实验表明,ERS条件下肿瘤的增殖受到抑制,而过表达的CXCL1可降低ERS下的Hep G2细胞的增殖抑制。结论成功构建了真核表达质粒pEGFP-C1-CXCL1,并在人胚肾293T细胞中瞬时表达成功,过表达的CXCL1可有效降低由ERS造成的肝癌细胞的增殖抑制。
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