细菌脂多糖及糖皮质激素对角膜上皮细胞Toll样受体表达的影响

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目的通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用。方法通过RT-PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLRmRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg.L-1、10μg.L-1、100μg.L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10μg.L-1LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg.L-1、10×103μg.L-1、100×103μg.L-1)进行干预,并检测TLRmRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达。结果 TLR1-TLR10mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6高表达。LPS能增加细胞TLRmRNA的表达,且当LPS为10μg.L-1时,TLRmRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加。加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLRmRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加。免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势与分子水平的表达一致。结论 LPS能改变角膜上皮细胞TLRmRNA的表达,提示上皮细胞表达的TLR与角膜抵御细菌的固有免疫密切相关;糖皮质激素可以调控LPS刺激的HCEC中TLR的表达,即轻度促进LPS刺激的HCEC中TLR的表达,在细菌侵袭角膜的早期,糖皮质激素可能具有一定的免疫促进作用。
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