衔接蛋白p66Shc CH2结构域分泌表达载体的构建及其表达

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目的:构建可以产生分泌p66^ShcCH2结构域重组蛋白的质粒,期望进一步研究p66^Shc的功能。方法:利用定点诱变的方法在pDisplay中去除HA和Myc表达序列,但保留小鼠IgK信号肽和PDGFR跨膜结构域。在小鼠IgK信号肽后是外源CH2结构域、凝血因子xa识别位点和Flag序列,与PDGFR跨膜结构域形成融合基因。PCR扩增得到完整表达片段后用于慢病毒载体上的克隆,之后在包装细胞Fx293中产生重组慢病毒用于后续实验。结果:经测序证实所构建的质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒构建正确
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