暗纹东方纯CD8α基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

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CD8是与Ⅰ型主要组织相容性复合体(MHCI)结合,是T细胞表面受体(TCR)的共受体.也是T淋巴细胞表面的重要标志物。该研究报道了暗纹东方纯胸腺等组织中克隆获得CD8αcDNA序列及其相应的基因组序列。克隆到的cDNA序列全长1061bp,包含1个657bp的开放读码框(ORF),编码218个氨基酸;其对应的基因组序列为1533bp,包含5个内含子和6个外显子。生物信息学分析表明,D8d蛋白质序列由信号肽、胞外可变区、铰链区、跨膜区和胞内区5部分组成。胞外区的可变区和铰链区部分各有两个高度保守的半胱氨酸残基,可能参与链内和链间二硫键的形成。氨基酸序列多重比对表明,暗纹东方鲍与其他鱼类的CD80α,特别是与鲽形目鱼类具有较高的同源性。为进一步研究暗纹东方纯CD8的生物学功能,构建了表达CD8α成熟肽胞外区的重组质粒,诱导表达出重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫大白兔,制备了抗血清。经间接ELISA法检测抗体效价表明。获得了高效价的特异性暗纹东方纯CD8c~抗体,为进一步研究CD8在鱼类淋巴细胞进化和适应性免疫中的作用奠定了基础。
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