【摘 要】
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目的 建立一种基于TaqMan探针的多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)同时检测冷冻蔬菜中4种食源性致病菌的方法.方法 针对金黄色葡萄
【机 构】
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青岛海关驻枣庄办事处,枣庄,277000
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目的 建立一种基于TaqMan探针的多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)同时检测冷冻蔬菜中4种食源性致病菌的方法.方法 针对金黄色葡萄球菌nuc基因、痢疾志贺菌rfc基因、沙门氏菌invA基因、单增李斯特氏菌hly基因,设计4对引物和探针,优化反应体系,建立稳定的多重qPCR反应体系.通过阳性菌株污染的方法验证体系的特异性,并确定了冷冻蔬菜样品在细菌水平的检出限.结果 各对引物和探针对目标菌有较强的特异性,对其他非目标菌进行检测均未检出,人工污染冷冻蔬菜中志贺菌的检出限为102 CFU/g,沙门氏菌和单增李斯特氏菌的检出限均为103 CFU/g,金黄色葡萄球菌的检出限为104 CFU/g.结论 本研究可以实现冷冻蔬菜样品中4种致病菌qPCR高效检测.
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